公开(公告)号：CN106591186A

公开(公告)日：2017-04-26

申请号：CN201611148004.X

申请日：2016-12-13

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 任迪峰 ,  马珺 ,  韩小雨 ,  廖梦梦

IPC: C12N1/20

CPC classification number: C12N1/20

Abstract: 本发明涉及一种将螺旋藻去壁获得螺旋藻原生质体的方法。取培养至对数中期OD560＝0.800‑1.000的螺旋藻培养液20ml，放入约30‑60个玻璃珠3‑10mm，在转速为100‑180rpm、温度为28℃的螺旋藻恒温光照培养箱中摇转18h，分装进入离心管，4000rpm/min、4℃离心10min，收集藻段，用15ml 1.5mol/L NaCl洗涤5min，离心，用Zarrouk液体培养基冲洗，离心，反复3‑4遍。加入酶溶液，在黑暗条件下进行酶解，酶解温度为28℃，时间为1h。酶解结束后，离心收集沉淀，即获得螺旋藻原生质体。得到的螺旋藻原生质体达25％‑50％。本发明提供一种高得率、操作方法简单，用时较短的制备螺旋藻FACHB904原生质体的方法。

公开(公告)号：CN107779448A

公开(公告)日：2018-03-09

申请号：CN201610988129.7

申请日：2016-11-09

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 任迪峰 ,  马珺 ,  申灿灿 ,  王璟悦

IPC: C12N13/00 ,  C12R1/645

CPC classification number: C12N13/00

Abstract: 本发明是一种快速筛选高产虾青素红法夫酵母菌株(Phaffia rhodozyma CGMCC2.1557)的方法。具体步骤如下：1)野生型红法夫酵母菌株活化后恒温培养箱中22～25℃培养，取少量单菌落加入种子培养基中，120～130r/min摇床培养；2)常压恒压室温等离子束(ARTP)诱变野生型红法夫酵母菌株150～180s；3)诱变后菌液转入离心管中，梯度稀释，涂平板；4)菌株转接到24孔板，摇床培养45～50h，激光扫描共聚焦显微镜观察，筛选候选突变菌株；5)种子培养基中摇床培养；6)种子液成比例接入发酵培养基中摇床培养；7)超声法提取虾青素，超声时间为1～1.2h，高效液相色谱法检测发酵液中虾青素含量；8)筛出高产虾青素突变株，产率较野生型提高了25～55％。本发明应用两步法筛选高产虾青素红法夫酵母菌株：菌落颜色初筛与细胞荧光强度复筛，这种方法操作简单、安全、无污染，且诱变菌株较稳定，降低工业生产的成本。