公开(公告)号：CN111154793A

公开(公告)日：2020-05-15

申请号：CN202010037272.4

申请日：2020-01-14

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 何晓青 ,  张琦 ,  金一 ,  梁雅静 ,  张佐然 ,  叶郁

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了基于CRISPR技术对大肠杆菌基因进行定点突变的方法。本发明方法包括：利用自身的同源重组系统结合pKOV质粒，将大肠杆菌基因组中靶基因替换为抗性标记基因，得到重组大肠杆菌；利用CRISPR/Cas9系统和λ-Red同源重组系统，将重组大肠杆菌基因组中的抗性标记基因替换为带有突变位点的靶基因。本发明建立了一种高效、简单的将大肠杆菌传统基因编辑技术与CRISPR系统相结合的靶基因定点突变方法。该过程建立的重组质粒pSGKP-km-spacer，可以应用于其它靶基因的定点突变。一方面，大大缩短了实验操作；另一方面，为后续实现大量靶基因定点突变研究奠定了基础。

公开(公告)号：CN111154793B

公开(公告)日：2024-04-09

申请号：CN202010037272.4

申请日：2020-01-14

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 何晓青 ,  张琦 ,  金一 ,  梁雅静 ,  张佐然 ,  叶郁

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了基于CRISPR技术对大肠杆菌基因进行定点突变的方法。本发明方法包括：利用自身的同源重组系统结合pKOV质粒，将大肠杆菌基因组中靶基因替换为抗性标记基因，得到重组大肠杆菌；利用CRISPR/Cas9系统和λ‑Red同源重组系统，将重组大肠杆菌基因组中的抗性标记基因替换为带有突变位点的靶基因。本发明建立了一种高效、简单的将大肠杆菌传统基因编辑技术与CRISPR系统相结合的靶基因定点突变方法。该过程建立的重组质粒pSGKP‑km‑spacer，可以应用于其它靶基因的定点突变。一方面，大大缩短了实验操作；另一方面，为后续实现大量靶基因定点突变研究奠定了基础。