公开(公告)号：CN119464233A

公开(公告)日：2025-02-18

申请号：CN202411705263.2

申请日：2024-11-26

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 杜旭光 ,  李攀 ,  马昭 ,  于舒洋

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/62 ,  C12N9/06 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株及其制备方法和应用，属于非洲猪瘟病毒技术领域。非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株为在非洲猪瘟病毒的p54蛋白上融合大肠杆菌二氢叶酸还原酶，大肠杆菌二氢叶酸还原酶的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，非洲猪瘟病毒为ASFV CN/GS 2018毒株。将失稳结构域融合到p54蛋白上，获得非洲猪瘟病毒复制缺陷型毒株，利用小分子配体甲氧苄啶调控p54蛋白的降解，从而调控病毒的复制、增殖，该毒株在降低病毒毒力、增强疫苗安全性、促进疫苗研发等方面具有重要的应用价值。

公开(公告)号：CN118853671A

公开(公告)日：2024-10-29

申请号：CN202410860562.7

申请日：2024-06-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  李攀 ,  杜旭光 ,  董鼎才 ,  高菲 ,  谢宇洋 ,  黄泓林 ,  孙思维 ,  马昭 ,  何诚 ,  赖锦盛

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明公开了一种基于脱硫弧菌I‑C型CRISPR基因编辑系统及其应用，属于基因编辑技术领域。上述基因编辑系统包括CRISPR RNA、I‑C型编辑器piggyBac载体和DNA剪切模块；I‑C型编辑器piggyBac载体包括Cascade组件、Cas3蛋白及Puro抗性基因所述Cascade组件由Cas5c蛋白、Cas7c蛋白、Cas8c蛋白和Cas11c蛋白复合而成，通过不同的2A肽连接，受同一CMV启动子调控。本发明所得基因编辑系统在哺乳动物细胞和动物中能够进行精确高效基因组编辑和碱基编辑。利用优化的编辑器和成对的PAM内向crRNAs，在人类和猪细胞系的多个内源位点实现了定义性的缺失。

公开(公告)号：CN114908097A

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202210693445.7

申请日：2022-06-17

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  卢天宇

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种将40种整合条形码片段与强力霉素(Doxycycline，Dox)调控CRISPR/Cas9编辑产生的indels相结合用于研究哺乳动物细胞在发育、再生和器官形成过程的谱系示踪研究方法。

公开(公告)号：CN119372234A

公开(公告)日：2025-01-28

申请号：CN202411503005.6

申请日：2024-10-25

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  李攀 ,  杜旭光 ,  董鼎才 ,  高菲 ,  谢宇洋 ,  黄泓林 ,  孙思维 ,  马昭 ,  何诚 ,  赖锦盛

IPC: C12N15/74 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N1/21 ,  C12N15/12 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种基于脱硫弧菌I‑C型CRISPR基因编辑系统及其应用，属于基因编辑技术领域。上述基因编辑系统包括CRISPR RNA(crRNA)piggyBac(PB)载体、I‑C型编辑器piggyBac载体以及piggyBac(PB)转座酶表达载体；I‑C型编辑器piggyBac载体包括两端的PB接头序列、Cascade组件、Cas3蛋白及Puro抗性基因，所述Cascade组件由Cas5c蛋白、Cas7c蛋白、Cas8c蛋白和Cas11c蛋白复合而成，通过不同的2A肽连接，受同一CMV启动子调控。本发明所得基因编辑系统在哺乳动物细胞和动物中能够进行精确高效基因组编辑和碱基编辑，利用优化的该编辑器和成对的PAM内向crRNAs，在人类和猪细胞系的多个内源位点实现了定义性的缺失，此外，结合外源同源臂供体载体，也可以实现大的基因片段的精确替换。

公开(公告)号：CN114908097B

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202210693445.7

申请日：2022-06-17

Applicant: 中国农业大学(CN)

Inventor： 于坤 ,  邓守龙 ,  许雪玲 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  卢天宇

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种将40种整合条形码片段与强力霉素(Doxycycline，Dox)调控CRISPR/Cas9编辑产生的indels相结合用于研究哺乳动物细胞在发育、再生和器官形成过程的谱系示踪研究方法。

公开(公告)号：CN111004816A

公开(公告)日：2020-04-14

申请号：CN201911194844.3

申请日：2019-11-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 吴森 ,  杜旭光 ,  李攀 ,  张丽君 ,  李智方 ,  胥春龙

IPC: C12N15/79 ,  C12N15/90 ,  C12N15/65

Abstract: 本发明提供一种基于Cas12a技术的外源基因定点敲入方法。利用Cas12a设计一种依赖微同源臂的外源基因精确定点整合的方法(简称MITI)，该方法通过简单的PCR或T4连接反应即可将识别序列插入到供体载体中，其中Cas12a在供体载体中的识别序列的方向与基因组中的靶点的方向是相反的，但远离PAM端的Cas12a识别切割的5个碱基与基因组靶位点的最后5个碱基是相同的，因此可以利用内外源DNA产生的互补粘性末端实现无缝连接。在将外源基因整合到基因组中的特定位点以及在对内源基因进行标记时，相较已有的Cas9HITI策略，MITI可以产生更高的精准插入效率，其有望成为精准基因插入的新工具。