公开(公告)号：CN107099850A

公开(公告)日：2017-08-29

申请号：CN201710463397.1

申请日：2017-06-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 吕嘉伟 ,  赵艳华 ,  刘忠华

IPC: C40B50/06 ,  C12N15/113

CPC classification number: C12N15/1082 ,  C12N15/113 ,  C12N2310/10 ,  C40B50/06

Abstract: 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法，涉及一种基因组敲除文库的构建方法。是要解决现有敲除文库构建方法存在物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力的问题。方法：一、构建Mspl.f‑library文库；二、获得20bp gRNA靶序列片段；三、构建PAM‑f.library文库；四、Lenti‑gRNA‑library文库构建。本发明获得gRNA文库的方法不依赖于已知物种基因组序列信息，避免了物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力等缺点，大大提高敲除文库的覆盖率。本发明用于构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库。

公开(公告)号：CN107099850B

公开(公告)日：2018-05-04

申请号：CN201710463397.1

申请日：2017-06-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 吕嘉伟 ,  赵艳华 ,  刘忠华

IPC: C40B50/06 ,  C12N15/113

Abstract: 一种通过酶切基因组构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库的方法，涉及一种基因组敲除文库的构建方法。是要解决现有敲除文库构建方法存在物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力的问题。方法：一、构建Mspl.f‑library文库；二、获得20bp gRNA靶序列片段；三、构建PAM‑f.library文库；四、Lenti‑gRNA‑library文库构建。本发明获得gRNA文库的方法不依赖于已知物种基因组序列信息，避免了物种基因信息不完善、人工设计覆盖度低且耗时耗力等缺点，大大提高敲除文库的覆盖率。本发明用于构建CRISPR/Cas9基因组敲除文库。

公开(公告)号：CN107227307A

公开(公告)日：2017-10-03

申请号：CN201710483310.7

申请日：2017-06-23

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 牟彦双 ,  翁晓刚 ,  刘忠华 ,  吕嘉伟 ,  郭佳

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/113 ,  C07K14/47 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  C12N15/907 ,  C12N2810/10

Abstract: 一种特异靶向猪IRS1基因的sgRNA导向序列及其应用，涉及一种sgRNA导向序列及应用。该sgRNA导向序列为CGTAGTACTCGAGGCGCGCG。本发明提供的sgRNA导向序列可通过CRISPR/Cas9系统敲除或编辑IRS1基因，进而消除IRS1的表达，为制备IRS1转基因猪奠定基础。本发明应用于基因工程领域。