公开(公告)号：CN110819699A

公开(公告)日：2020-02-21

申请号：CN201911178556.9

申请日：2019-11-27

Applicant: 辽宁大学

Inventor： 陈颖 ,  段宇婧 ,  毛大庆 ,  罗义 ,  李丽丹

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/70 ,  C12R1/92

Abstract: 本发明涉及一种水环境中人类粪便指示物的定量检测方法。包括：选用人类粪便DNA为模板，采用PCR扩增目的基因CPQ_056片段；切胶回收纯化扩增后的目的基因，将基因连接在载体pTOPO-Blunt上，然后转化感受态大肠杆菌细胞，挑选阳性克隆子；用琼脂糖凝胶电泳检测扩大培养菌液的质量，选克隆成功的菌液提取质粒，检测质粒浓度，换算出质粒所携带目的基因的拷贝数，并按10倍为稀释梯度稀释，作为标准品；将标准品进行定量PCR扩增，做出标准曲线。再将水样DNA进行定量PCR扩增，从而最终得出水环境中人类粪便指示基因的拷贝数。本发明不依赖于微生物培养，操作简单，检测速度高，灵敏度高，数量上也更为直观。