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公开(公告)号：CN118109650A
公开(公告)日：2024-05-31
申请号：CN202410440586.7
申请日：2024-04-12
Applicant: 西北农林科技大学 , 浙江洪晟生物科技股份有限公司
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种基于RPA‑CRISPR/Cas12a检测猪A型塞内卡病毒的试剂盒及核酸检测模板的制备方法，通过样品预处理将采集自猪的生物检材制成用于SVA核酸检测的模板提取液，随后根据建立的免核酸提取SVA检测体系，通过RPA方法进行扩增，利用Cas12a和crRNA组装的复合物识别并结合RPA扩增的特异产物上的特定位点序列以激活Cas12a的附属切割活性，从而对ssDNA探针进行切割，最后在紫外灯下肉眼观察显色结果判定猪感染SVA的情况。本发明对SVA的检测操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为现场筛查提供了快速检测试剂。
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公开(公告)号：CN112725291B
公开(公告)日：2023-07-04
申请号：CN202011626875.4
申请日：2020-12-30
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用。对PCV2DNA中的GAS样基序进行突变，使得突变的PCV2DNA在病毒复制中不能与STAT5蛋白结合，并通过病毒拯救获得复制能力远低于野生型PCV2毒株的突变毒株。该突变毒株可以用于研究PCV2复制机制和减毒活疫苗，从而为PCV2的防控提供新思路。
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公开(公告)号：CN111454969B
公开(公告)日：2022-08-26
申请号：CN201910825513.9
申请日：2019-09-02
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明提供了一种带有His和Flag双标签的猪细小病毒(PPV)全长感染性克隆的制备方法，包括如下步骤：1)以PPV DNA为模板，分别使用序列如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4所示引物扩增，再将所得扩增产物为模板，以序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.4所示引物进行融合PCR扩增，得F3片段；2)将pKQLL‑T质粒经Stu I和SnaB I产生平末端切口的限制性内切酶线性化质粒，再将F3片段与其连接，得重组质粒；3)使用限制性内切酶BamH I和Xba I双酶切重组质粒，回收带有His和Flag双标签的PP PPV全长片段；4)将带有His和Flag双标签的PPV全长片段转染动物细胞，即可。本发明的方法能够成功产生高滴度的PPV，可用于抗猪细小病毒药物的筛选，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109706127B
公开(公告)日：2022-08-02
申请号：CN201910080924.X
申请日：2019-01-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种弱毒株PCV2RmA，为降低PCV2致病能力得到的病毒；降低PCV2致病能力为突变PCV2Cap蛋白与宿主细胞蛋白p32互作的关键氨基酸，从而减少病毒出核和减弱病毒的免疫抑制作用；本发明公开的弱毒株可用于PCV2致病机制研究和PCV2疫苗研发。
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公开(公告)号：CN112725291A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202011626875.4
申请日：2020-12-30
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种GAS样基序突变的PCV2毒株及其制备方法和应用。对PCV2DNA中的GAS样基序进行突变，使得突变的PCV2DNA在病毒复制中不能与STAT5蛋白结合，并通过病毒拯救获得复制能力远低于野生型PCV2毒株的突变毒株。该突变毒株可以用于研究PCV2复制机制和减毒活疫苗，从而为PCV2的防控提供新思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112593013A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011602492.3
申请日：2020-12-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒双重RPA检测试剂盒，包括由SEQ.ID.NO.2和SEQ.ID.NO.5所示核苷酸序列组成的牛副流感病毒RPA检测引物组，以及由SEQ.ID.NO.8和SEQ.ID.NO.10所示核苷酸序列组成的牛呼吸道合胞体病毒RPA检测引物组。所述试剂盒基于重组酶聚合酶扩增法，以利用RNA反转录形成的cDNA为模板并在优化的反应温度和时间下进行扩增反应，利用核酸凝胶电泳获得检测结果。本发明可用于同时对牛副流感病毒和牛呼吸道合胞体病毒进行检测，操作简单，并且具有较高的灵敏度和特异性，为牛病原体的现场筛查提供了快速检测试剂。
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公开(公告)号：CN109706179A
公开(公告)日：2019-05-03
申请号：CN201910045118.9
申请日：2019-01-17
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/864 , C12N7/00 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种稳定携带遗传标记的猪细小病毒感染性克隆系统及其构建方法和应用。在猪细小病毒(PPV)基因组两端的ITR序列中间引入平末端酶切位点，利用In-Fusion技术，并通过在PPV中间序列引入一个无义突变，获得携带遗传标记并能够与野生毒株进行区分的PPV全长感染性克隆质粒。本发明利用反向遗传操作技术所构建的感染性克隆质粒在体外转染PK15细胞后，经连续盲传可以诱导细胞发生与亲本株相同的细胞病变效应，能够拯救出具有与亲本株生长趋势相似、稳定携带遗传标记的拯救病毒。应用该克隆系统能够快速方便的在基因组的任意位置进行碱基突变，为后续研发猪细小病毒的弱毒苗以及多联苗提供便利、有效的工具。
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公开(公告)号：CN108373997A
公开(公告)日：2018-08-07
申请号：CN201810129782.7
申请日：2018-02-08
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12N9/22 , C12N7/00
Abstract: 本发明提供一种pMKRN1基因敲除的猪体细胞及其制备方法和应用，采用基因敲除技术，获得突变的PK-15细胞，利用此突变的PK-15细胞可快速复制并获得高滴度的PCV2病毒，进而为PCV2致病机制研究和PCV2灭活疫苗和减毒疫苗制备提供高效的病毒扩增细胞。
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公开(公告)号：CN101792744A
公开(公告)日：2010-08-04
申请号：CN201010140805.8
申请日：2010-04-07
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种表达PRRSV免疫原基因的重组杆状病毒及其制备方法和应用。具体地说涉及一种重组杆状病毒，所述重组杆状病毒带有SEQ ID NO.1所示的序列，其表面展示PRRSV结构蛋白GP5。利用所述重组病毒接种昆虫细胞，培养48～72h，收取感染细胞，-40℃/37℃冻融，离心，取上清测定病毒PFU，调整病毒的滴度使其达到109PFU/ml，制得一种安全、有效的基因工程亚单位疫苗，用于预防PRRS。
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公开(公告)号：CN101792740A
公开(公告)日：2010-08-04
申请号：CN201010140792.4
申请日：2010-04-07
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种表达PRRSV免疫原基因的重组杆状病毒及其制备方法和应用。具体地说涉及一种重组杆状病毒，所述重组杆状病毒带有SEQ ID NO.1所示的序列，其表面展示PRRSV结构蛋白GP3。利用所述重组病毒接种昆虫细胞，培养48～72h，收取感染细胞，-40℃/37℃冻融，离心，取上清测定病毒PFU，调整病毒的滴度使其达到109PFU/ml，制得一种安全、有效的基因工程亚单位疫苗，用于预防PRRS。
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