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公开(公告)号：CN105524940B
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201511025413.6
申请日：2015-12-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。
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公开(公告)号：CN105543164A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610112297.X
申请日：2016-02-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/071
CPC classification number: C12N5/0631 , C12N2509/00
Abstract: 本发明公开了一种原代奶牛乳腺上皮细胞的分离培养方法：将泌乳期奶牛的乳腺组织剪切成组织块后用胶原酶/透明质酸酶消化液消化，将消化后呈乳糜状的组织块接种在培养皿进行培养，1～2天后组织块周围即有细胞游离出组织并贴壁生长，之后培养期间，每天采用机械刮除法去除梭形样成纤维细胞，直至大约4～5天后大量铺路石样乳腺上皮细胞成簇成片生长并互相融合时进行首次传代。首次传代时利用差速消化法使用胰蛋白酶消除可能混杂的极少量成纤细胞，即得到纯度很高的奶牛乳腺上皮细胞。本方法中乳腺上皮细胞可以在短时间从乳糜状组织中迁出；并且主要采用机械刮除法去除少量混杂的成纤维细胞污染，因此获得的乳腺上皮细胞损伤小、纯度高。
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公开(公告)号：CN106923929A
公开(公告)日：2017-07-07
申请号：CN201710103948.3
申请日：2017-02-24
Applicant: 西北农林科技大学
CPC classification number: A61D7/00 , A61M5/3286 , A61M2207/00 , A61M2210/1007 , A61M2250/00
Abstract: 本发明公开了一种小鼠乳腺注射针及其应用：乳腺注射针采用对移液器吸头头部热拉伸变形以及对拉伸部分形成的细管状结构进行截断处理而制成，本发明制备的乳腺注射针材料易得、注射效果理想，可为乳腺病理等研究提供研究材料，本发明与传统注射方法易造成乳腺机械损伤或需借助昂贵的微型注射器相比，具有更为广阔的应用价值。
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公开(公告)号：CN105524940A
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201511025413.6
申请日：2015-12-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
CPC classification number: C12N15/8509 , C12N15/8771
Abstract: 本发明公开了一种基于组蛋白甲基化水平的修饰提高牛克隆效率的载体、细胞及方法。本发明提供的载体包括阻遏物表达载体和含有阻遏操纵子的表达载体，在转染时将两者共转染到供体细胞中；所述的含有阻遏操纵子的表达载体中插入有牛KDM4B或牛KDM4C基因。将阳性转染的细胞作为供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚培养至36h时，诱导表达牛KDM4B和KDM4C。本发明可以有效减弱体细胞克隆胚在合子激活时期的组蛋白H3K9me3表观遗传修饰水平，从而显著提高后期牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎，胚胎移植后克隆牛的出生率也显著提高。
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