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公开(公告)号：CN102094036A
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN201010592737.9
申请日：2010-12-13
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 一种等位基因双敲除打靶载体系统及其构建方法，该系统由pGT-V1和pGT-V2两个互补载体组成，每个载体都包含两个同向的LoxP元件，其间分别含有正筛选标记基因Neo/GFP和Hyg/RFP，外侧含有一个负筛选标记基因TK。同时设计两个“8碱基”多克隆位点分布在两个LoxP元件与负筛选标记之间以供同源臂的插入。本发明构建的打靶载体系统将两个互补的打靶载体共转染受体细胞，经过药物和荧光双筛选标记的选择，一次性实现对靶基因两个等位基因的遗传修饰或敲除，并且可以通过转入Cre酶与LoxP元件相互作用去除整合到基因组上的筛选标记基因，能够缩短获得纯合敲除靶细胞的时间，提高转基因动物的安全性，为开展动物转基因研究提供有价值的技术平台。
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