公开(公告)号：CN105567726A

公开(公告)日：2016-05-11

申请号：CN201610041168.6

申请日：2016-01-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 江聪 ,  刘慧泉 ,  许金荣 ,  王晨芳 ,  王建华 ,  张世杰 ,  陈代朋 ,  吴春兰

IPC: C12N15/80

Abstract: 一种高产脱氧雪腐镰刀菌烯醇的单敲除突变体菌株的构建方法，包括以下步骤：(1)利用split-PCR方法，将禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成过程中的负调控因子高亲和性磷酸二酯酶基因FgPDE2从禾谷镰刀菌PH-1的基因组中敲除，获得单敲除突变体；FgPDE2的基因及上下游序列如SEQ ID NO：1所示；(2)采用PEG-介导的原生质体转化到禾谷镰刀菌中，然后采用抗性筛选标记筛选敲除转化子；最后以禾谷镰刀菌的基因组为参照，利用5F和6R引物验证敲除转化子的目的基因被新霉素抗性基因所替代。本发明单敲除突变体菌株产毒量大幅提高；而双敲除突变体菌株产毒量更高，且该基因改造突变体丧失了对小麦穗的侵染能力，大大降低了双敲除突变体菌株可能的扩散造成的不良后果。

公开(公告)号：CN105483175A

公开(公告)日：2016-04-13

申请号：CN201610041250.9

申请日：2016-01-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 江聪 ,  王晨芳 ,  许金荣 ,  刘慧泉 ,  王建华 ,  项萍 ,  张强 ,  尹涛 ,  唐喆

IPC: C12P17/18 ,  C12R1/77

CPC classification number: C12P17/181

Abstract: 一种禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成的诱导物及方法，所述诱导物为2mM～4mM的腺苷-3′，5′-环单磷酸、2mM～4mM的腺苷-3′，5′-环单磷酸钠盐或8～12mg/ml的咖啡因。本发明还包括一种诱导禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成的方法。本发明采用cAMP、cAMP钠盐或咖啡因诱导禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成，可大大提高产毒量及缩短毒素合成周期。

公开(公告)号：CN105567726B

公开(公告)日：2019-10-22

申请号：CN201610041168.6

申请日：2016-01-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 江聪 ,  刘慧泉 ,  许金荣 ,  王晨芳 ,  王建华 ,  张世杰 ,  陈代朋 ,  吴春兰

IPC: C12N15/80

Abstract: 一种高产脱氧雪腐镰刀菌烯醇的单敲除突变体菌株的构建方法，包括以下步骤：(1)利用split‑PCR方法，将禾谷镰刀菌脱氧雪腐镰刀菌烯醇合成过程中的负调控因子高亲和性磷酸二酯酶基因FgPDE2从禾谷镰刀菌PH‑1的基因组中敲除，获得单敲除突变体；FgPDE2的基因及上下游序列如SEQ ID NO：1所示；(2)采用PEG‑介导的原生质体转化到禾谷镰刀菌中，然后采用抗性筛选标记筛选敲除转化子；最后以禾谷镰刀菌的基因组为参照，利用5F和6R引物验证敲除转化子的目的基因被新霉素抗性基因所替代。本发明单敲除突变体菌株产毒量大幅提高；而双敲除突变体菌株产毒量更高，且该基因改造突变体丧失了对小麦穗的侵染能力，大大降低了双敲除突变体菌株可能的扩散造成的不良后果。