公开(公告)号：CN102021195B

公开(公告)日：2012-11-21

申请号：CN201010517353.0

申请日：2010-10-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈鹏 ,  李新宇 ,  李玉红

IPC: C12N15/70 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种利用原核表达系统高效制备蛋白质分子量标准的方法，包括以下步骤：(1)选择常用低分子量标准为起始蛋白质分子量标准A；(2)选择稀有密码子含量低或者无稀有密码子的基因序列为模板，并设计引物依次获取不同的目的片段，使目的序列与pET28a载体连接后编码区的分子量为(1)中所设定分子量，最适等电点在4-9之间；(3)将目的片段按照一定的酶切位点分别插入表达载体pET28a-(+)，筛选的阳性克隆分别转入大肠杆菌BL21_star(DE3)进行诱导表达；(4)对不同蛋白进行表达形式的鉴定；(5)分别用亲和层析纯化及包涵体纯化等方法纯化目的蛋白，即为蛋白质分子量标准。

公开(公告)号：CN102021195A

公开(公告)日：2011-04-20

申请号：CN201010517353.0

申请日：2010-10-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈鹏 ,  李新宇 ,  李玉红

IPC: C12N15/70 ,  C12P21/02

Abstract: 本发明公开了一种利用原核表达系统高效制备蛋白质分子量标准的方法，包括以下步骤：(1)选择常用低分子量标准为起始蛋白质分子量标准A；(2)选择稀有密码子含量低或者无稀有密码子的基因序列为模板，并设计引物依次获取不同的目的片段，使目的序列与pET28a载体连接后编码区的分子量为(1)中所设定分子量，最适等电点在4-9之间；(3)将目的片段按照一定的酶切位点分别插入表达载体pET28a-(+)，筛选的阳性克隆分别转入大肠杆菌BL21_star(DE3)进行诱导表达；(4)对不同蛋白进行表达形式的鉴定；(5)分别用亲和层析纯化及包涵体纯化等方法纯化目的蛋白，即为蛋白质分子量标准。