公开(公告)号：CN114540341A

公开(公告)日：2022-05-27

申请号：CN202210033141.8

申请日：2022-01-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 龚春梅 ,  李佳阳 ,  任洁洁 ,  珠拉太 ,  周文菲 ,  唐磊 ,  余有本 ,  白娟 ,  周杰 ,  王文钊

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种快速高效的DNA5’侧翼序列克隆方法，包括以下2个主要步骤：(1)待测样本为模板，通过不同LAD引物组合与基因特异性R引物配对，使用热不对称交错PCR的方法进行第一轮PCR扩增；(2)以不同稀释倍数的第一轮PCR扩增产物作为模板，结合巢式PCR的引物设计方法，使用通用引物AC1与设计在第1轮特异性R引物上游的不同基因特异性R引物配对，通过热不对称交错PCR的方法进行第二轮PCR扩增。配合判断方法能够快速鉴别正确扩增条带范围，在原HiTail‑PCR的基础上由3轮扩增缩减为2轮扩增，且可由特异引物之间的已知间隔距离快速锁定特异扩增并排除部分非特异扩增，大幅减少非特异扩增带来的干扰。

公开(公告)号：CN114540341B

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202210033141.8

申请日：2022-01-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 龚春梅 ,  李佳阳 ,  任洁洁 ,  珠拉太 ,  周文菲 ,  唐磊 ,  余有本 ,  白娟 ,  周杰 ,  王文钊

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种快速高效的DNA5’侧翼序列克隆方法，包括以下2个主要步骤：(1)待测样本为模板，通过不同LAD引物组合与基因特异性R引物配对，使用热不对称交错PCR的方法进行第一轮PCR扩增；(2)以不同稀释倍数的第一轮PCR扩增产物作为模板，结合巢式PCR的引物设计方法，使用通用引物AC1与设计在第1轮特异性R引物上游的不同基因特异性R引物配对，通过热不对称交错PCR的方法进行第二轮PCR扩增。配合判断方法能够快速鉴别正确扩增条带范围，在原HiTail‑PCR的基础上由3轮扩增缩减为2轮扩增，且可由特异引物之间的已知间隔距离快速锁定特异扩增并排除部分非特异扩增，大幅减少非特异扩增带来的干扰。