公开(公告)号：CN113514445B

公开(公告)日：2023-12-26

申请号：CN202110903587.7

申请日：2021-08-05

Applicant: 荆州市第一人民医院(荆州市肿瘤医院、长江大学附属第一医院)

Inventor： 易华伟 ,  张嫦丽 ,  王清清 ,  范文 ,  罗伟 ,  辛陈琦

IPC: G01N21/64 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P21/02 ,  C07K19/00 ,  C12Q1/37

Abstract: 本发明提供了一种基于荧光偏振的去泛素化酶活性检测方法。所述方法包括如下步骤：1、去泛素化酶检测探针的制备，包括制备融合蛋白Ub‑linker‑Cys、连接BODIPY探针、质谱检测；2、检测去泛素化酶的活性，包括选择去泛素化酶、去泛素化对探针FP值的影响、实时检测去泛素化酶的活性。该检测方法是基于检测荧光偏振，荧光偏振检测的是平行方向和垂直方向荧光强度的比例关系，其不易受荧光探针的浓度、溶液温度和pH以及其他荧光信号的干扰，在测量去泛素化酶的活性时，步骤简单、耗时短，且探针和去泛素化酶的用量少。此外，该方法中制备的探针也可用于去泛素化酶抑制剂的筛选，且是高通量的。

公开(公告)号：CN113514445A

公开(公告)日：2021-10-19

申请号：CN202110903587.7

申请日：2021-08-05

Applicant: 荆州市第一人民医院(荆州市肿瘤医院、长江大学附属第一医院)

Inventor： 易华伟 ,  张嫦丽 ,  王清清 ,  范文 ,  罗伟 ,  辛陈琦

IPC: G01N21/64 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P21/02 ,  C07K19/00 ,  C12Q1/37

Abstract: 本发明提供了一种基于荧光偏振的去泛素化酶活性检测方法。所述方法包括如下步骤：1、去泛素化酶检测探针的制备，包括制备融合蛋白Ub‑linker‑Cys、连接BODIPY探针、质谱检测；2、检测去泛素化酶的活性，包括选择去泛素化酶、去泛素化对探针FP值的影响、实时检测去泛素化酶的活性。该检测方法是基于检测荧光偏振，荧光偏振检测的是平行方向和垂直方向荧光强度的比例关系，其不易受荧光探针的浓度、溶液温度和pH以及其他荧光信号的干扰，在测量去泛素化酶的活性时，步骤简单、耗时短，且探针和去泛素化酶的用量少。此外，该方法中制备的探针也可用于去泛素化酶抑制剂的筛选，且是高通量的。