公开(公告)号：CN102732525B

公开(公告)日：2014-02-26

申请号：CN201210223195.7

申请日：2012-06-29

Applicant: 苏州大学

Inventor： 王建南 ,  杨云星 ,  黄海燕 ,  李明忠 ,  卢神州

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种用于克隆来自于野蚕丝素蛋白的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽（-RGD-）的DNA分子及克隆方法。该克隆方法操作简单，准确度高；获得的单倍、双倍、多倍含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因序列结果准确。

公开(公告)号：CN102703488A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210149947.X

申请日：2012-05-15

Applicant: 苏州大学

Inventor： 王建南 ,  裔洪根 ,  黄海燕 ,  杨云星 ,  李明忠 ,  卢神州

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开一种克隆类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法以及克隆不同倍数的类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的方法。所述方法为将人工合成的末端分别含有可以配对的同尾酶的三个双链DNA分子连接到质粒中，两对同尾酶的位点分别被限制性内切酶切除后再连接，形成符合非结晶区氨基酸的三联密码子，转化、筛选获得含有完整类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的质粒，再利用在完整的类家蚕丝素蛋白非结晶区基因5’端和3’端设计的同尾酶进行加倍克隆，转化、筛选获得含有多倍类家蚕丝素蛋白非结晶区基因的质粒。最后双酶切后得到单倍和多倍类家蚕丝素蛋白非结晶区基因。本发明所述方法操作简便，获得的基因准确性高。

公开(公告)号：CN102703425A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210149948.4

申请日：2012-05-15

Applicant: 苏州大学

Inventor： 王建南 ,  裔洪根 ,  黄海燕 ,  杨云星 ,  李明忠 ,  卢神州

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开一种克隆类家蚕丝素蛋白重链核心区重组基因的方法，即克隆来自于家蚕丝素重链高度重复区几种典型基序与类家蚕丝素重链非结晶区重组基因的方法。所述方法为将人工合成的末端分别含有配对同尾酶的三个双链DNA分子连接到质粒中并加倍，获得含有不同倍数类家蚕丝素蛋白重链非结晶区基因的质粒，酶切后插入到用限制性核酸内切酶AgeI消化的含有编码（GAGAGX）m肽段的基因序列的载体质粒中，获得含有不同倍数类家蚕丝素重链非结晶区基因和不同倍数重链核心区高度重复序列GAGAGX肽段基因的重组质粒，最后双酶切即得各重组基因。本发明所述方法操作简便，获得的类家蚕丝素蛋白重链核心区基因准确性高。

公开(公告)号：CN102732525A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201210223195.7

申请日：2012-06-29

Applicant: 苏州大学

Inventor： 王建南 ,  杨云星 ,  黄海燕 ,  李明忠 ,  卢神州

IPC: C12N15/12 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明涉及基因工程领域，特别涉及一种用于克隆来自于野蚕丝素蛋白的含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽（-RGD-）的DNA分子及克隆方法。该克隆方法操作简单，准确度高；获得的单倍、双倍、多倍含精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸的多肽的基因序列结果准确。