公开(公告)号：CN103981175A

公开(公告)日：2014-08-13

申请号：CN201410119211.7

申请日：2014-03-27

Applicant: 苏州大学

Inventor： 李凯 ,  徐惠芬 ,  张安迪 ,  张佳

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N15/85 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/34 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了博来霉素抗性报告基因突变体及其用途，其中，在博来霉素基因的起始密码子ATG与其后第一个氨基酸密码子GCC之间插入一定长度的异源靶序列核苷酸片段，一定长度的异源核苷酸片段是指大于等于1bp碱基且小于1kb碱基的3的整数倍或非3整数倍的异源靶序列核苷酸片段。本方法通过对博来霉素抗性报告基因进行插入突变，构建可用于检测核酸酶活性的双抗质粒。通过观察在不同抗性上的菌落的有无或细胞的生存与死亡进行核酸酶活性与脱靶效应的评估。该方法与现有检测技术相比具有快速、准确、方法简单、成本低的优点；尤为突出的是，这一新方法的敏感性远远高于现有技术。