一种利用嗜水气单胞菌外膜蛋白抗原制备卵黄抗体及其制备方法

    公开(公告)号:CN111733177A

    公开(公告)日:2020-10-02

    申请号:CN202010561249.5

    申请日:2020-06-18

    Inventor: 林晨韬 林岗 黄镇

    Abstract: 本发明公开了一种利用嗜水气单胞菌外膜蛋白抗原制备卵黄抗体及其制备方法,为了构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗,我们根据已发表的该菌的外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP;以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定了抗体效价达到1:100000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48小时后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成了嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步的疫苗免疫和效价检测奠定了基础。

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