一种基于三重扩增策略的新型液体活检电化学传感器用于骨肉瘤早期诊断及疗效监测

    公开(公告)号:CN116769909A

    公开(公告)日:2023-09-19

    申请号:CN202310480301.8

    申请日:2023-04-28

    Abstract: 本发明公开一种基于三重扩增策略的新型液体活检电化学传感器用于骨肉瘤早期诊断及疗效监测,包括如下步骤:(1)根据MiR‑181b基因系列设计特异性的两条单链短探针。(2)以miR‑181b为模板,在T4RNA连接酶‑2的作用下,将两条单链短探针连接形成长嵌合体探针(L‑cmDNA)。(3)在LCR反应体系中,以L‑cmDNA为模板,通过DNA连接酶将两条互补的短系列探针连接形成长双链DNA(L‑dsDNA)并进行大量循环扩增。(3)将L‑dsDNA通过生物素‑链霉亲和素的共价作用结合到亲和素磁珠(MMBs)表面,通过滴加抗FAM的辣根过氧化物酶与L‑dsDNA上的FAM结合。最后将MMBs固定到磁电极,并将电极置于检测底液中,在HRP的催化下,底液中H2O2能氧化TMB产生电化学信号。本方法具有经济、快速、高灵敏度及特异性等优点。

    一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

    公开(公告)号:CN112708684A

    公开(公告)日:2021-04-27

    申请号:CN202011503796.4

    申请日:2020-12-17

    Abstract: 本发明公开一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,包括如下步骤:(1)根据MecA基因的保守系列设计特异性的两条双链短探针(S‑dsDNA)。(2)在LCR反应体系中,以MecA基因为模板,通过DNA连接酶将两条短系列的探针连接形成长的双链DNA(L‑dsDNA)。接着以L‑dsDNA模板,进行循环扩增形成大量L‑dsDNA。(3)将形成的带有巯基及生物素修饰的L‑dsDNA通过金‑硫键固定于BSA修饰的金电极上,通过滴加亲和素‑PolyHRP与L‑dsDNA上的生物素结合,最后将电极置于含TMB和H2O2的底液中,在HRP的催化下,H2O2能氧化TMB产生电化学信号。本方法具有经济、快速、高灵敏度及特异性等优点,可用于单碱基突变系列的检测,并且实现了对关节假体周围感染病人关节液中MRSA的检测。

    一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素纳米靶向药物的制备及体外抗骨肉瘤的研究

    公开(公告)号:CN110124058A

    公开(公告)日:2019-08-16

    申请号:CN201910488672.4

    申请日:2019-06-06

    Abstract: 本发明公开一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素纳米靶向药物的制备及体外抗骨肉瘤的研究。包括如下步骤:(1)以无血清培养基培养BM-MSC,并用外泌体提取试剂盒提取外泌体。(2)将外泌体与盐酸阿霉素按一定比例混合,加三乙胺脱盐,后将混合液置于透析袋4°C过夜制备外泌体-阿霉素药物。(3)将制备的药物置于酶标仪,于490 nm处测量其吸收峰,计算药物的包载量。(4)将制备的药物用于体外抗骨肉瘤MG63细胞的疗效研究。本方法选择的MSC具有体内毒副作用小、低免疫原性、肿瘤靶向性及可体外大量扩增等优点,结合外泌体在体内广泛分布及具有归巢性的优点,其包载阿霉素后可有效地增强阿霉素对骨肉瘤细胞的杀伤作用。

    一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体-阿霉素纳米靶向药物的制备及体外抗骨肉瘤的研究

    公开(公告)号:CN110124058B

    公开(公告)日:2021-11-26

    申请号:CN201910488672.4

    申请日:2019-06-06

    Abstract: 本发明公开一种来源于骨髓间充质干细胞外泌体‑阿霉素纳米靶向药物的制备及体外抗骨肉瘤的研究。包括如下步骤:(1)以无血清培养基培养BM‑MSC,并用外泌体提取试剂盒提取外泌体。(2)将外泌体与盐酸阿霉素按一定比例混合,加三乙胺脱盐,后将混合液置于透析袋4°C过夜制备外泌体‑阿霉素药物。(3)将制备的药物置于酶标仪,于490 nm处测量其吸收峰,计算药物的包载量。(4)将制备的药物用于体外抗骨肉瘤MG63细胞的疗效研究。本方法选择的MSC具有体内毒副作用小、低免疫原性、肿瘤靶向性及可体外大量扩增等优点,结合外泌体在体内广泛分布及具有归巢性的优点,其包载阿霉素后可有效地增强阿霉素对骨肉瘤细胞的杀伤作用。

    一种基于NiCo2O4纳米片状材料及肽链切割效应的胰蛋白酶电化学传感平台的构建

    公开(公告)号:CN108445062B

    公开(公告)日:2020-05-19

    申请号:CN201810242363.4

    申请日:2018-03-22

    Abstract: 本发明公开一种基于NiCo2O4纳米片状材料及肽链切割效应的胰蛋白酶电化学传感平台的构建。利用NiCo2O4纳米片状材料作为电活性基底材料,通过将纳米石墨相氮化碳标记肽(g‑C3N4@petide)对基底材料的信号放大作用,制备一种电化学传感器并应用于胰蛋白酶的检测。基于NiCo2O4纳米片状材料的稳定性及优良导电性使其能加快电子的转移速度并提高电流信号,而g‑C3N4及肽链的引入,将起到空间阻碍作用,明显降低电流信号。当该传感界面在胰蛋白酶溶液中孵化,胰蛋白酶可以催化水解肽键,起到对于肽链的切割效应,使g‑C3N4@petide从电极表面释放,从而提高电流信号。该方法用来监测胰蛋白浓度及可进一步应用于其抑制剂筛选。

    一种基于NiCo2O4纳米片状材料及肽链切割效应的胰蛋白酶电化学传感平台的构建

    公开(公告)号:CN108445062A

    公开(公告)日:2018-08-24

    申请号:CN201810242363.4

    申请日:2018-03-22

    Abstract: 本发明公开一种基于NiCo2O4纳米片状材料及肽链切割效应的胰蛋白酶电化学传感平台的构建。利用NiCo2O4纳米片状材料作为电活性基底材料,通过将纳米石墨相氮化碳标记肽(g-C3N4@petide)对基底材料的信号放大作用,制备一种电化学传感器并应用于胰蛋白酶的检测。基于NiCo2O4纳米片状材料的稳定性及优良导电性使其能加快电子的转移速度并提高电流信号,而g-C3N4及肽链的引入,将起到空间阻碍作用,明显降低电流信号。当该传感界面在胰蛋白酶溶液中孵化,胰蛋白酶可以催化水解肽键,起到对于肽链的切割效应,使g-C3N4@petide从电极表面释放,从而提高电流信号。该方法用来监测胰蛋白浓度及可进一步应用于其抑制剂筛选。

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