公开(公告)号：CN112226378B

公开(公告)日：2022-07-12

申请号：CN202011195277.6

申请日：2020-10-31

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈新华 ,  黎球华 ,  许丽冰 ,  母尹楠 ,  何天良

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C07K14/81 ,  A61K38/57 ,  A61P37/04 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提供一种大黄鱼半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin重组蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。本发明构建了高效表达大黄鱼Cystatin重组蛋白的毕赤酵母工程菌，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020369。利用毕赤酵母工程菌生产的大黄鱼Cystatin重组蛋白，可抑制木瓜蛋白酶、大黄鱼组织蛋白酶B和S的活性，上调巨噬细胞内炎症相关因子TNFα的表达水平，并诱导巨噬细胞中抗菌活性物质一氧化氮产生，表明大黄鱼Cystatin重组蛋白作为蛋白酶抑制剂和免疫增强剂具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN112779258A

公开(公告)日：2021-05-11

申请号：CN202110227210.4

申请日：2021-03-02

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈新华 ,  黎球华 ,  邵光明 ,  丁阳阳 ,  母尹楠 ,  许丽冰

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89

Abstract: 本发明公开了一种大黄鱼CRISPR/Cas9基因编辑方法，所述方法包括以下步骤：利用体外转录合成Cas9 mRNA和靶基因sgRNA，将它们与酚红混合，Cas9 mRNA和靶基因sgRNA的终浓度分别为1000 ng/μL和120 ng/μL，再利用显微注射的方式，将混合物导入卵膜变硬之前的大黄鱼受精卵中；孵化48 h后，检测并获得相应的基因突变体。本发明首次成功建立了大黄鱼基因编辑的方法，不仅可用于大黄鱼基因功能的研究，还为大黄鱼遗传改良育种开辟新的途径。

公开(公告)号：CN117660544A

公开(公告)日：2024-03-08

申请号：CN202311667175.3

申请日：2023-12-06

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈新华 ,  邵光明 ,  崔雪凡 ,  石源 ,  黎球华 ,  段雅如

IPC: C12N15/89 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种基于受精卵卵壳软化的大黄鱼高效基因组编辑方法，包括以下步骤：首先获取大黄鱼自然受精的受精卵，利用5mg/ml的链霉蛋白酶在24℃水温下消化受精卵30min以使卵壳软化，将Cas9蛋白、sgRNA及酚红混合，采用显微注射方法，将混合物注射入胚盘期受精卵中，孵化48h后，可以获得存活率64％，外源靶基因突变率最高达86.3％。本发明第一次利用卵壳软化的方法在海水鱼中建立了基因组编辑方法，相比于以往的基因组编辑方法，该基因组编辑方法不仅操作简单，而且可大大提高基因组编辑受精卵的孵化率和基因组编辑效率，为开展大黄鱼基因的功能研究和大黄鱼遗传改良提供了新的技术手段。

公开(公告)号：CN112226378A

公开(公告)日：2021-01-15

申请号：CN202011195277.6

申请日：2020-10-31

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 陈新华 ,  黎球华 ,  许丽冰 ,  母尹楠 ,  何天良

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C07K14/81 ,  A61K38/57 ,  A61P37/04 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明提供一种大黄鱼半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin重组蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。本发明构建了高效表达大黄鱼Cystatin重组蛋白的毕赤酵母工程菌，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2020369。利用毕赤酵母工程菌生产的大黄鱼Cystatin重组蛋白，可抑制木瓜蛋白酶、大黄鱼组织蛋白酶B和S的活性，上调巨噬细胞内炎症相关因子TNFα的表达水平，并诱导巨噬细胞中抗菌活性物质一氧化氮产生，表明大黄鱼Cystatin重组蛋白作为蛋白酶抑制剂和免疫增强剂具有良好的应用前景。