公开(公告)号：CN110684796A

公开(公告)日：2020-01-14

申请号：CN201910969503.2

申请日：2019-10-12

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 关跃峰 ,  王杰 ,  匡华琴

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/53 ,  A01H5/00 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了CRISPR-Cas9特异性敲除大豆脂肪氧化酶基因的方法及其应用，属于大豆分子育种和生物技术领域。该方法包括：在大豆脂肪氧化酶基因编码区设计同时靶向高度同源的GmLox1和GmLox2的sgRNA-GmLox1/2，以及靶向GmLox3的sgRNA-GmLox3；针对每个sgRNA单独构建CRISPR-Cas9基因敲除载体，之后混合侵染大豆子叶节；经大豆稳定遗传转化，植株Gmlox-28和Gmlox-60同时敲除3个GmLox基因；自交两代之后，在T2代植株中筛选到5株T-DNA与编辑位点分离的GmLox全缺失突变体。该方法为直接且有目标的快速创制无豆腥味大豆新种质提供新策略。

公开(公告)号：CN110684796B

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN201910969503.2

申请日：2019-10-12

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 关跃峰 ,  王杰 ,  匡华琴

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/53 ,  A01H5/00 ,  A01H5/10 ,  A01H6/54

Abstract: 本发明公开了CRISPR‑Cas9特异性敲除大豆脂肪氧化酶基因的方法及其应用，属于大豆分子育种和生物技术领域。该方法包括：在大豆脂肪氧化酶基因编码区设计同时靶向高度同源的GmLox1和GmLox2的sgRNA‑GmLox1/2，以及靶向GmLox3的sgRNA‑GmLox3；针对每个sgRNA单独构建CRISPR‑Cas9基因敲除载体，之后混合侵染大豆子叶节；经大豆稳定遗传转化，植株Gmlox‑28和Gmlox‑60同时敲除3个GmLox基因；自交两代之后，在T2代植株中筛选到5株T‑DNA与编辑位点分离的GmLox全缺失突变体。该方法为直接且有目标的快速创制无豆腥味大豆新种质提供新策略。