公开(公告)号：CN117025726A

公开(公告)日：2023-11-10

申请号：CN202311115912.9

申请日：2023-08-31

Applicant: 湖南大学

Inventor： 柯国梁 ,  殷垚 ,  张晓兵 ,  谢威

IPC: C12Q1/6816

Abstract: 本发明提供了一种基于CRISPR‑DNA识别器件的细胞成像的试剂及其应用。以细胞膜表面两种特异性蛋白为靶点，利用两条多功能适体序列实现细胞膜表面蛋白的逻辑识别，从而将调控CRISPR‑Cas12a核酸酶活性的触发链绑定在靶细胞膜表面，Cas12a/crRNA二元复合物通过与触发链的识别和结合使Cas12a在细胞膜表面被原位激活。被激活的Cas12a在活细胞膜表面在一定空间内裂解周围的胆固醇DNA四面体底物探针，使BHQ2基团远离细胞膜，TAMRA荧光快速恢复。本发明不仅能够在20min内实现靶细胞精准成像，而且在含有0.1％靶细胞的血液样本中实现了灵敏的识别。

公开(公告)号：CN114410790B

公开(公告)日：2024-04-12

申请号：CN202210100232.9

申请日：2022-01-27

Applicant: 湖南大学

Inventor： 陈美 ,  柯国梁 ,  周敏 ,  殷垚 ,  张晓兵

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种用于检测ctDNA的生物传感检测系统及其检测方法，包括有：球形核酸报告子、RCA产物和CRISPR/Cas12a体系；其中：球形核酸报告子为巯基DNA链修饰的金纳米粒子；RCA产物为待检测物ctDNA与5’磷酸化线性挂锁探针进行RCA扩增反应获得的产物；CRISPR/Cas12a体系中包含有LbCas12a蛋白和crRNA形成的稳定二元复合物。本发明SNA在生理环境中具有优异的抵抗核酸酶切割的能力。因此，用SNA报告子代替ssDNA报告子可以提高CRISPR/Cas12a体系的稳定性；并利用滚环扩增(RCA)具有操作简单、反应温度温和、扩增效率高等优点，将RCA与CRISPR/Cas12a体系结合在一起，在可以显著提高体系的灵敏度。

公开(公告)号：CN114410790A

公开(公告)日：2022-04-29

申请号：CN202210100232.9

申请日：2022-01-27

Applicant: 湖南大学

Inventor： 陈美 ,  柯国梁 ,  周敏 ,  殷垚 ,  张晓兵

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/6844

Abstract: 本发明公开了一种用于检测ctDNA的生物传感检测系统及其检测方法，包括有：球形核酸报告子、RCA产物和CRISPR/Cas12a体系；其中：球形核酸报告子为巯基DNA链修饰的金纳米粒子；RCA产物为待检测物ctDNA与5’磷酸化线性挂锁探针进行RCA扩增反应获得的产物；CRISPR/Cas12a体系中包含有LbCas12a蛋白和crRNA形成的稳定二元复合物。本发明SNA在生理环境中具有优异的抵抗核酸酶切割的能力。因此，用SNA报告子代替ssDNA报告子可以提高CRISPR/Cas12a体系的稳定性；并利用滚环扩增(RCA)具有操作简单、反应温度温和、扩增效率高等优点，将RCA与CRISPR/Cas12a体系结合在一起，在可以显著提高体系的灵敏度。