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公开(公告)号：CN106676132A
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201710174053.9
申请日：2017-03-22
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/82
Abstract: 一种高效的植物双元诱导基因表达重组质粒，由以下步骤实现：构建受生长素IAA诱导的DR5启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的BD结构域表达；构建受低温诱导的启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的AD结构域表达；构建受Gal4激活的启动子，以此启动报告基因GFP的表达；将上述三个表达段导入同一个植物表达载体pBI121，即可。本发明需要两个诱导条件同时存在时才能诱导报告基因表达，减少干扰；同时，本发明利用Gal4/UAS系统基本原理，实现了诱导信号的两级放大，可以提高诱导信号的检测灵敏度；另外，本发明还具有很大的灵活性和延伸性，多种响应化学信号、物理信号的DNA元件都可以用于构建双元诱导表达系统，可以广泛应用于现代遗传学和分子生物学的研究。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106676132B
公开(公告)日：2020-02-14
申请号：CN201710174053.9
申请日：2017-03-22
Applicant: 湖南农业大学
IPC: C12N15/82
Abstract: 一种高效的植物双元诱导基因表达重组质粒，由以下步骤实现：构建受生长素IAA诱导的DR5启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的BD结构域表达；构建受低温诱导的启动子，以此启动子启动酵母转录激活蛋白Gal4的AD结构域表达；构建受Gal4激活的启动子，以此启动报告基因GFP的表达；将上述三个表达段导入同一个植物表达载体pBI121，即可。本发明需要两个诱导条件同时存在时才能诱导报告基因表达，减少干扰；同时，本发明利用Gal4/UAS系统基本原理，实现了诱导信号的两级放大，可以提高诱导信号的检测灵敏度；另外，本发明还具有很大的灵活性和延伸性，多种响应化学信号、物理信号的DNA元件都可以用于构建双元诱导表达系统，可以广泛应用于现代遗传学和分子生物学的研究。
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公开(公告)号：CN108211425B
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN201810015432.8
申请日：2018-01-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: B01D15/38 , C07D209/18 , G01N30/02
Abstract: 本发明公开了一种用于植物生长素分离纯化的层析柱及分离方法，层析柱内的树脂中固定有IAA亲和蛋白，如IAA7蛋白、TIR1受体蛋白和TIR1‑IAA共受体蛋白等中的任意一种。本发明突破了传统方法难以从微量植物样品中有效分离和纯化IAA的困难，解决了传统方法操作复杂、有机抽提不环保和分离纯化效率低的问题，大大提高IAA的分离纯化效率，在植物鲜重为10～50mg情况下能从植物匀浆液中快速一步分离纯化到足量的IAA用于液相‑质谱联用仪检测。本发明中的分离纯化方法大大简化了IAA的分离纯化过程、操作简单并且成本低廉。
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公开(公告)号：CN111060696B
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN201911372695.5
申请日：2019-12-27
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种降低植物小分子信号肽假阳性率的方法，包括以下步骤：S1、利用植物原生质体制备总蛋白，再将总蛋白超滤后，收集滤液，将滤液样品先经过还原再进行烷基化处理后，得到待测样品；S2、利用液质联用仪对待测样品进行测定，并对测定后的数据进行分析。该方法从没有细胞壁保护的原生质体中提取蛋白质更容易且原生质体更利于保持蛋白与小肽的完整性，不仅操作简单，而且测定结果中假阳性率更低。
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公开(公告)号：CN111060696A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201911372695.5
申请日：2019-12-27
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种降低植物小分子信号肽假阳性率的方法，包括以下步骤：S1、利用植物原生质体制备总蛋白，再将总蛋白超滤后，收集滤液，将滤液样品先经过还原再进行烷基化处理后，得到待测样品；S2、利用液质联用仪对待测样品进行测定，并对测定后的数据进行分析。该方法从没有细胞壁保护的原生质体中提取蛋白质更容易且原生质体更利于保持蛋白与小肽的完整性，不仅操作简单，而且测定结果中假阳性率更低。
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公开(公告)号：CN108211425A
公开(公告)日：2018-06-29
申请号：CN201810015432.8
申请日：2018-01-08
Applicant: 湖南农业大学
IPC: B01D15/38 , C07D209/18 , G01N30/02
Abstract: 本发明公开了一种用于植物生长素分离纯化的层析柱及分离方法，层析柱内的树脂中固定有IAA亲和蛋白，如IAA7蛋白、TIR1受体蛋白和TIR1‑IAA共受体蛋白等中的任意一种。本发明突破了传统方法难以从微量植物样品中有效分离和纯化IAA的困难，解决了传统方法操作复杂、有机抽提不环保和分离纯化效率低的问题，大大提高IAA的分离纯化效率，在植物鲜重为10～50mg情况下能从植物匀浆液中快速一步分离纯化到足量的IAA用于液相‑质谱联用仪检测。本发明中的分离纯化方法大大简化了IAA的分离纯化过程、操作简单并且成本低廉。
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