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公开(公告)号：CN105821075B
公开(公告)日：2017-09-12
申请号：CN201610254568.5
申请日：2016-04-22
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种茶树咖啡因合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建方法，是以茶树咖啡因合成酶基因为基础设计两条靶序列T1和T2；再分别构建靶序列T1和和T2的sgRNA表达盒；再将双元表达载体pYLCRISPR/Cas9P35S‑H与上述T1sgRNA表达盒及T2sgRNA表达盒进行酶切‑连接反应，使T1sgRNA表达盒与T2sgRNA表达盒连接后插入该双元表达载体中，从而获得CRISPR/Cas9基因组编辑载体。本发明以茶树咖啡因合成酶为例，联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术，构建了包含茶树咖啡因合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体，为CRISPR/Cas9基因编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础，同时对其它植物CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建提供了技术支撑。
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公开(公告)号：CN105821075A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610254568.5
申请日：2016-04-22
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/82 , C12N15/66 , C12N2800/80
Abstract: 一种茶树咖啡因合成酶CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建方法，是以茶树咖啡因合成酶基因为基础设计两条靶序列T1和T2；再分别构建靶序列T1和和T2的sgRNA表达盒；再将双元表达载体pYLCRISPR/Cas9P35S?H与上述T1sgRNA表达盒及T2sgRNA表达盒进行酶切?连接反应，使T1sgRNA表达盒与T2sgRNA表达盒连接后插入该双元表达载体中，从而获得CRISPR/Cas9基因组编辑载体。本发明以茶树咖啡因合成酶为例，联合采用常规PCR、Overlapping PCR和Golden Gate Cloning技术，构建了包含茶树咖啡因合成酶双靶点的CRISPR/Cas9基因编辑载体，为CRISPR/Cas9基因编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础，同时对其它植物CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建提供了技术支撑。
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公开(公告)号：CN105296510B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201510887788.7
申请日：2015-12-07
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种黄花蒿二氢黄酮醇氧化酶基因AaDHFO2，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。黄花蒿二氢黄酮醇氧化酶AaDHFO2能够催化二氢黄酮醇形成黄酮醇，为体外催化二氢黄酮醇生成黄酮醇，以及黄花蒿体内调控儿黄花蒿组分的组成提供了一种新的可选择途径。此外，本发明通过原核表达制备重组AaDHFO2，克服了直接从黄花蒿中分离该蛋白的困难，降低了成本。
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公开(公告)号：CN105296510A
公开(公告)日：2016-02-03
申请号：CN201510887788.7
申请日：2015-12-07
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明提供了一种黄花蒿二氢黄酮醇氧化酶基因AaDHFO2，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。黄花蒿二氢黄酮醇氧化酶AaDHFO2能够催化二氢黄酮醇形成黄酮醇，为体外催化二氢黄酮醇生成黄酮醇，以及黄花蒿体内调控儿黄花蒿组分的组成提供了一种新的可选择途径。此外，本发明通过原核表达制备重组AaDHFO2，克服了直接从黄花蒿中分离该蛋白的困难，降低了成本。
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