公开(公告)号：CN102559843B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201210052627.2

申请日：2012-03-02

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 邓子牛 ,  刘利平 ,  李大志 ,  龙桂友 ,  李建挥

IPC: C12Q1/06 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/64

Abstract: 一种柑橘溃疡病菌侵染过程实时观察方法，包括以下步骤：（1）利用三亲本杂交法将广泛寄主载体pMP2463上的增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）导入野生型柑橘溃疡病菌，获得增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的溃疡病菌；（2）将获得的EGFP标记的柑橘溃疡病菌通过喷雾方式接种到柑橘叶片表面，通过注射方式接种到柑橘叶肉间隙；（3）撕取叶表皮或者利用冷冻切片方法制样，在激光共聚焦显微镜下观察柑橘溃疡病菌在叶表面及叶肉间隙的数量和分布情况。采用本发明，能够利用EGFP标记的柑橘溃疡病菌对该病原菌在侵染柑橘过程中的附着、繁殖和空间分布进行实时观察，从而获得柑橘溃疡病与柑橘互作的时空关系；且操作简便，快捷。

公开(公告)号：CN102559843A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201210052627.2

申请日：2012-03-02

Applicant: 湖南农业大学

Inventor： 邓子牛 ,  刘利平 ,  李大志 ,  龙桂友 ,  李建挥

IPC: C12Q1/06 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/64

Abstract: 一种柑橘溃疡病菌侵染过程实时观察方法，包括以下步骤：（1）利用三亲本杂交法将广泛寄主载体pMP2463上的增强型绿色荧光蛋白基因（egfp）导入野生型柑橘溃疡病菌，获得增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的溃疡病菌；（2）将获得的EGFP标记的柑橘溃疡病菌通过喷雾方式接种到柑橘叶片表面，通过注射方式接种到柑橘叶肉间隙；（3）撕取叶表皮或者利用冷冻切片方法制样，在激光共聚焦显微镜下观察柑橘溃疡病菌在叶表面及叶肉间隙的数量和分布情况。采用本发明，能够利用EGFP标记的柑橘溃疡病菌对该病原菌在侵染柑橘过程中的附着、繁殖和空间分布进行实时观察，从而获得柑橘溃疡病与柑橘互作的时空关系；且操作简便，快捷。