可溶性截短的人TRAIL活性蛋白的制备方法

    公开(公告)号:CN102021173B

    公开(公告)日:2012-11-07

    申请号:CN201010243089.6

    申请日:2010-07-30

    Applicant: 湖北大学

    Inventor: 王行国 叶青 陈凡

    Abstract: 本发明提出了一种可溶性截短的人TRAIL蛋白的制备方法,其步骤为:A)、根据Genebank发表的人TRAIL蛋白可溶性蛋白的氨基酸序列,按细菌遗传密码的偏好性设计并合成寡聚DNA单链片段,B)、三次PCR合成完整的双链DNA,C)、利用T-载扩增,并将扩增的双链DNA片段插入表达载体并筛选阳性转化子,D)、截短人TRAIL蛋白在大肠杆菌中低温表达,E)、用三步法对该蛋白纯化,F)、截短人TRAIL蛋白的测定。本发明实现了在大肠杆菌细胞内高效表达截短人TRAIL蛋白及其纯化制备技术,克服了现有技术中易形成不溶性包涵体的问题。该方法操作简单、发酵时间短、纯化容易并保证该蛋白无任何修饰,蛋白达到电泳纯。可以直接用于生化、分子生物学、肿瘤学的研究工作以及肿瘤治疗的临床前期或临床药物的开发。

    可溶性截短的人TRAIL活性蛋白的制备方法

    公开(公告)号:CN102021173A

    公开(公告)日:2011-04-20

    申请号:CN201010243089.6

    申请日:2010-07-30

    Applicant: 湖北大学

    Inventor: 王行国 叶青 陈凡

    Abstract: 本发明提出了一种可溶性截短的人TRAIL蛋白的制备方法,其步骤为:A)根据Genebank发表的人TRAIL蛋白可溶性蛋白的氨基酸序列,按细菌遗传密码的偏好性设计并合成寡聚DNA单链片段,B)三次PCR合成完整的双链DNA,C)利用T-载扩增,并将扩增的双链DNA片段插入表达载体并筛选阳性转化子,D)截短人TRAIL蛋白在大肠杆菌中低温表达,E)用三步法对该蛋白纯化,F)截短人TRAIL蛋白的测定。本发明实现了在大肠杆菌细胞内高效表达截短人TRAIL蛋白及其纯化制备技术,克服了现有技术中易形成不溶性包涵体的问题。该方法操作简单、发酵时间短、纯化容易并保证该蛋白无任何修饰,蛋白达到电泳纯。可以直接用于生化、分子生物学、肿瘤学的研究工作以及肿瘤治疗的临床前期或临床药物的开发。

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