公开(公告)号：CN115124609A

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202110331296.5

申请日：2021-03-29

Applicant: 深圳北京大学香港科技大学医学中心

Inventor： 刘伟 ,  陈伟荻 ,  刘宇扬 ,  刘佳 ,  陈倩苟 ,  蒋日婷

IPC: C07K14/435 ,  C07K1/14 ,  C07K1/16 ,  C07K1/22

Abstract: 本发明公开了一种改进的纯化可溶性果蝇TRP离子通道蛋白的方法。本发明方法是通过培养w[1118]品系的野生型果蝇，借由分离得到的果蝇头部，在含有十二烷基‑β‑D‑麦芽糖苷（N‑Dodecyl‑β‑D‑maltoside,DDM）去垢剂的缓冲液中，以6xNORPA863‑1095蛋白为诱饵，对INAD蛋白复合物进行亲和纯化，然后用PGEX‑4T‑1载体表达GST‑TRP‑CT 1260‑1275蛋白进行竞争性洗脱，得到可溶性的TRP离子通道蛋白，最后使用凝胶层析得到电泳单一条带的果蝇TRP离子通道蛋白。使用本方法将使得果蝇TRP蛋白可以通过野生型果蝇直接表达，大大降低了使用昆虫细胞纯化蛋白的生产成本和生产难度。

公开(公告)号：CN116926040A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202210323089.X

申请日：2022-03-30

Applicant: 深圳北京大学香港科技大学医学中心

Inventor： 刘伟 ,  刘佳 ,  刘宇扬 ,  蒋日婷 ,  陈倩苟

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/866 ,  C07K14/435 ,  C07K1/22 ,  C07K1/16

Abstract: 本发明公开了一种使用SF9昆虫细胞表达系统共表达和纯化果蝇“视网膜变性蛋白RDGC和钙调蛋白CaM”蛋白复合物的方法。本发明方法是通过使用昆虫细胞表达纯化体系，采用Bac‑to‑Bac杆状病毒表达系统，通过转染试剂感染SF9昆虫细胞，然后通过共表达的方式感染昆虫细胞获得大量目的蛋白RDGC/CaM复合物，最终通过Strep‑tag亲和层析+凝胶过滤层析的方法体外纯化果蝇视网膜变性蛋白RDGC和钙调蛋白CaM复合物。通过SF9昆虫细胞表达系统将果蝇CaM蛋白与果蝇RDGC蛋白共表达和纯化其复合物的方法，对后续研究RDGC/CaM蛋白复合物在光信号转导中的调控机理及相关结构信息具有重要的科学意义和后续广阔的应用转化前景。