一种快速高通量检测赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用

    公开(公告)号:CN116430041A

    公开(公告)日:2023-07-14

    申请号:CN202310392047.6

    申请日:2023-04-12

    Applicant: 海南大学

    Abstract: 本发明属于食用菌育种技术领域,具体涉及一种利用流式细胞术测定赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用;将TPFN荧光探针用于赤芝原生质体的流式荧光标记,从而区分原生质体与细胞壁再生的原生质体,并可通过流式数据处理实现对原生质体细胞壁再生过程的量化监测。将待测原生质体与探针孵育10分钟,再通过流式细胞仪的BluFL2通道采集数据,与对照样品的荧光强度直方图相比较,则可判断细胞壁再生程度。与传统的电镜成像方法相比,本发明能够在15分钟内实现细胞数大于5000个的原生质体样品分析,可发展为快速判断原生质体活性的方法以及细胞壁再生监测的手段,为灵芝育种以及灵芝细胞壁相关的生理代谢研究提供重要工具。

    促产胞外囊泡的肉色隔孢伏革菌培养方法、胞外囊泡提取方法及其应用

    公开(公告)号:CN117363555A

    公开(公告)日:2024-01-09

    申请号:CN202311327690.7

    申请日:2023-10-12

    Applicant: 海南大学

    Abstract: 本发明公开了一种促产胞外囊泡的肉色隔孢伏革菌培养方法、胞外囊泡提取方法及其应用。属于生物技术领域。对肉色隔孢伏革菌的培养时的接种量、时间、培养基配方等条件进行了优化,运用木质纤维素生物质‑无机氮源(LCB‑IN)培养基培养,并优化了接种量与接种时间,使得通过LCB‑IN培养获得的发酵液易于与常规梯度离心法和排阻色谱法联用,有效解决了肉色隔孢伏革菌外囊泡提取量少,提取困难的问题,获得了高纯度的胞外囊泡。本方法可获得平均颗粒浓度为5.27×1010/L的胞外囊泡(n=2),其蛋白浓度能达到67.77μg/mL,其大小和形态与已报道的真菌胞外囊泡一致。

    α-鹅膏毒肽的核酸适配体及其筛选方法和应用

    公开(公告)号:CN118562808A

    公开(公告)日:2024-08-30

    申请号:CN202410465789.1

    申请日:2024-04-18

    Applicant: 海南大学

    Abstract: 本发明公开了一种α‑鹅膏毒肽的核酸适配体及其筛选方法和应用,筛选方法包括靶标固定法与文库固定法,具体步骤为将文库和靶标‑磁珠溶液混合孵育,磁场分离得到结合的核酸序列,经扩增后再经多轮筛选,初步筛选出较高亲和力的核酸适配体,将筛出来的核酸适配体文库与新的随机序列组成联合文库,通过与捕获链互补配对,从而固定到磁珠上,再加入α‑鹅膏毒肽溶液进行孵育,将上清液中的核酸序列经扩增和单链制备后,得到次级文库,多轮筛选后进行高通量测序,对核酸序列进行二级结构的预测和分析,以α‑鹅膏毒肽作为靶标进行特异性结合实验,最终得出核酸适配体。本发明为构建基于核酸适配体的鹅膏毒肽检测传感体系提供分子识别单元基础的技术支持。

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