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公开(公告)号：CN118389649A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410575796.7
申请日：2024-05-10
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/6827
Abstract: 本发明公开了一种通用型‘枷锁’CRISPR/Cas单碱基核酸检测系统并对microRNA进行单碱基检测的方法及应用。该方法针对靶标突变链（与靶标miRNA有1个碱基不同）也能激活Cas13a/crRNA复合体反式剪切活性并造成检测假阳性以及当前单碱基检测方法检测位点局限性的问题，引入肽核酸（PNA），利用PNA与核酸具有较强的亲和力的特性，通过Watson‑Crick碱基互补配对原则，将突变链进行“封闭”，实现只有靶标miRNA才能激活Cas13a/crRNA复合体反式剪切活性，通过剪切带有荧光基团和猝灭剂的RNA链，释放荧光信号，最终实现单碱基检测的特异性需求，达到去除或者降低非特异性信号（假阳性）的目的；同时，并实现在miRNA序列上几乎所有单碱基检测位点都可检测区分。
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