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公开(公告)号：CN115572748B
公开(公告)日：2023-03-10
申请号：CN202211479304.1
申请日：2022-11-24
Applicant: 海南大学三亚南繁研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用悬浮培养细胞生产抗肿瘤脱氧三尖杉酯碱的方法包括以下步骤：利用前体饲喂（三尖杉碱、L‑高亮氨酸）+诱导（刺激剂）的方式在海南粗榧叶腋细胞悬浮培养生产抗肿瘤脱氧三尖杉酯类生物碱的方法，该方法通过建立一种生长速度快的细胞系，解决生物量少的问题，该方法的核心内容是通过细胞这个生物反应器，将三尖杉碱转化为脱氧三尖杉酯碱，具有生产周期短而稳定、不占用耕地、产量稳定、有效成分含量高、不破坏自然资源的特点，具有极大的开发利用价值。
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公开(公告)号：CN110628784A
公开(公告)日：2019-12-31
申请号：CN201911048834.9
申请日：2019-10-31
Applicant: 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种海南粗榧中催化多巴胺和3-(4-羟苯基)丙醛缩合的NCS-like PR10基因，所述NCS-like PR10基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还公开了含有上述NCS-like PR10基因、该基因的编码蛋白、表达盒、载体、工程菌以及转基因细胞系等在调控多巴胺和3-(4-羟苯基)丙醛反应合成苯乙基异喹啉类生物碱中的应用。将NCS-like PR10基因转化到目标植株或悬浮细胞中，可促进苯乙基异喹啉类生物碱含量的增加，为今后利用基因工程或细胞工程技术获得具有抗癌活性的药物或食物提供了重要的理论依据，具有广阔的应用前景和极大的经济价值。
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公开(公告)号：CN103725725B
公开(公告)日：2016-04-20
申请号：CN201310749388.0
申请日：2013-12-30
Applicant: 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南大学
IPC: C12P17/02
Abstract: 一种利用海南粗榧非胚性细胞悬浮培养生产紫杉醇及其前体物巴卡亭III的方法，含以下步骤：（1）取海南粗榧外植体，在愈伤诱导培养基上进行培养，获得非胚性愈伤组织；（2）将非胚性愈伤组织在愈伤增殖培养基上进行增殖培养，获得生长迅速疏松的细胞团；（3）将细胞团接种至细胞悬浮启动培养基中培养，获得液体培养的非胚性悬浮细胞系；（4）将非胚性悬浮细胞系静置沉淀后，取沉淀接种至液体增殖培养基中，获得悬浮细胞；（5）将悬浮细胞离心沉淀、弃上清，沉淀经后续处理，用液相色谱法分离提纯获得紫杉醇及其前体物巴卡亭III，该方法具有生产效率高、不占用林地、不破坏自然资源、产量稳定、有效成分含量高、提取工艺简单的特点。
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公开(公告)号：CN104830947B
公开(公告)日：2017-06-23
申请号：CN201510266988.0
申请日：2015-05-25
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明公开了一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法，包括以下步骤：(1)选取植物幼嫩组织，破碎后，加入酶解液混匀，酶解其细胞壁；(2)将产物洗涤、纯化后获得原生质体悬浮液，并在原生质体悬浮液中加入水解酶以保持细胞壁纤维素的低水平再生；(3)将加入水解酶的原生质体在亚低温或亚高温条件下温浴，温浴结束后，加超纯水以降低溶液渗透势，定时测定原生质体的直径；(4)用获得的原生质体的直径值，计算多个原生质体单位时间、单位渗透势、单位面积细胞膜上水分从细胞外进入细胞内的净速度Lp的平均值，该Lp平均值和所选植物适宜温度下的Lp值差值越大，说明其亚低温或亚高温耐受性越差。该方法具有适用性广、分辨率高的特点。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110628784B
公开(公告)日：2022-10-25
申请号：CN201911048834.9
申请日：2019-10-31
Applicant: 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种海南粗榧中催化多巴胺和3‑(4‑羟苯基)丙醛缩合的NCS‑like PR10基因，所述NCS‑like PR10基因的CDS区核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还公开了含有上述NCS‑like PR10基因、该基因的编码蛋白、表达盒、载体、工程菌以及转基因细胞系等在调控多巴胺和3‑(4‑羟苯基)丙醛反应合成苯乙基异喹啉类生物碱中的应用。将NCS‑like PR10基因转化到目标植株或悬浮细胞中，可促进苯乙基异喹啉类生物碱含量的增加，为今后利用基因工程或细胞工程技术获得具有抗癌活性的药物或食物提供了重要的理论依据，具有广阔的应用前景和极大的经济价值。
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公开(公告)号：CN105466874B
公开(公告)日：2018-10-30
申请号：CN201610085844.X
申请日：2016-02-15
Applicant: 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南大学
IPC: G01N21/31
Abstract: 本发明公开了一种测定三尖杉科植物中三尖杉生物碱总碱含量的方法，包括以下步骤：(1)选取三尖杉碱标准品，加入变色酸溶液、浓磷酸和过氧化氢，摇匀后微波加热，得标准品反应液；(2)将标准品反应液冷却至室温，定容，并比色，将比色得到的吸光值与步骤(1)中的三尖杉碱标准溶液的浓度相关联，建立三尖杉碱吸光度值‑浓度的标准曲线；(3)选取三尖杉科植物样品或三尖杉科植物的悬浮培养细胞，提取其中的三尖杉生物碱总碱，(4)参照步骤(2)、(3)，测其吸光值，将测得的吸光值代入上述吸光度值‑浓度的标准曲线，获得三尖杉科植物样品的浓度，经换算即获得三尖杉科植物样品中三尖杉生物碱总碱含量。该方法简便、安全、快捷、准确。
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公开(公告)号：CN115572748A
公开(公告)日：2023-01-06
申请号：CN202211479304.1
申请日：2022-11-24
Applicant: 海南大学三亚南繁研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用悬浮培养细胞生产抗肿瘤脱氧三尖杉酯碱的方法包括以下步骤：利用前体饲喂（三尖杉碱、L‑高亮氨酸）+诱导（刺激剂）的方式在海南粗榧叶腋细胞悬浮培养生产抗肿瘤脱氧三尖杉酯类生物碱的方法，该方法通过建立一种生长速度快的细胞系，解决生物量少的问题，该方法的核心内容是通过细胞这个生物反应器，将三尖杉碱转化为脱氧三尖杉酯碱，具有生产周期短而稳定、不占用耕地、产量稳定、有效成分含量高、不破坏自然资源的特点，具有极大的开发利用价值。
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公开(公告)号：CN105466874A
公开(公告)日：2016-04-06
申请号：CN201610085844.X
申请日：2016-02-15
Applicant: 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所 , 海南大学
IPC: G01N21/31
CPC classification number: G01N21/31
Abstract: 本发明公开了一种测定三尖杉科植物中三尖杉生物碱总碱含量的方法，包括以下步骤：(1)选取三尖杉碱标准品，加入变色酸溶液、浓磷酸和过氧化氢，摇匀后微波加热，得标准品反应液；(2)将标准品反应液冷却至室温，定容，并比色，将比色得到的吸光值与步骤(1)中的三尖杉碱标准溶液的浓度相关联，建立三尖杉碱吸光度值-浓度的标准曲线；(3)选取三尖杉科植物样品或三尖杉科植物的悬浮培养细胞，提取其中的三尖杉生物碱总碱，(4)参照步骤(2)、(3)，测其吸光值，将测得的吸光值代入上述吸光度值-浓度的标准曲线，获得三尖杉科植物样品的浓度，经换算即获得三尖杉科植物样品中三尖杉生物碱总碱含量。该方法简便、安全、快捷、准确。
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公开(公告)号：CN104830947A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510266988.0
申请日：2015-05-25
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明公开了一种测定植物亚低温或亚高温耐受性的方法，包括以下步骤：(1)选取植物幼嫩组织，破碎后，加入酶解液混匀，酶解其细胞壁；(2)将产物洗涤、纯化后获得原生质体悬浮液，并在原生质体悬浮液中加入水解酶以保持细胞壁纤维素的低水平再生；(3)将加入水解酶的原生质体在亚低温或亚高温条件下温浴，温浴结束后，加超纯水以降低溶液渗透势，定时测定原生质体的直径；(4)用获得的原生质体的直径值，计算多个原生质体单位时间、单位渗透势、单位面积细胞膜上水分从细胞外进入细胞内的净速度Lp的平均值，该Lp平均值和所选植物适宜温度下的Lp值差值越大，说明其亚低温或亚高温耐受性越差。该方法具有适用性广、分辨率高的特点。
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