公开(公告)号：CN113278601B

公开(公告)日：2022-07-08

申请号：CN202110531780.2

申请日：2021-05-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 吴杰群 ,  朱梅芳 ,  章旭红 ,  储消和

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K7/62 ,  C12P21/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种腺苷酰化蛋白A6突变体以及其编码基因，以及其作为腺苷酰化结构域关键酶在催化合成多粘菌素中的应用。所述腺苷酰化蛋白A6突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的腺苷酰化蛋白A6第516位氨基酸经点突变而得。本发明利用基因工程和酶工程手段，对A域的活性位点进行研究，通过构建突变体确定了与A域底物特异性相关的关键氨基酸残基(A6第516位残基)，本发明获得的突变体G516A与腺苷酰化蛋白A6相比，底物特异性发生改变，对L‑Ala的活性大幅提高，出现了对L‑Arg的活性，证明对该位点的氨基酸残基进行改造能够改变腺苷酰化蛋白的底物识别，为多粘菌素家族化合物结构的扩展提供了新的途径。

公开(公告)号：CN113278601A

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN202110531780.2

申请日：2021-05-17

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 吴杰群 ,  朱梅芳 ,  章旭红 ,  储消和

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K7/62 ,  C12P21/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种腺苷酰化蛋白A6突变体以及其编码基因，以及其作为腺苷酰化结构域关键酶在催化合成多粘菌素中的应用。所述腺苷酰化蛋白A6突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的腺苷酰化蛋白A6第516位氨基酸经点突变而得。本发明利用基因工程和酶工程手段，对A域的活性位点进行研究，通过构建突变体确定了与A域底物特异性相关的关键氨基酸残基(A6第516位残基)，本发明获得的突变体G516A与腺苷酰化蛋白A6相比，底物特异性发生改变，对L‑Ala的活性大幅提高，出现了对L‑Arg的活性，证明对该位点的氨基酸残基进行改造能够改变腺苷酰化蛋白的底物识别，为多粘菌素家族化合物结构的扩展提供了新的途径。