公开(公告)号：CN116590209A

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202310695262.3

申请日：2023-06-13

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 张博 ,  贺周霖 ,  柳志强 ,  唐蒙娜 ,  肖云颖 ,  沈盼 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明主要通过(1)增加大肠杆菌生物体内泛解酸合成途径中关键基因拷贝数，进一步使碳通量流向D‑泛酸的合成；(2)为继续增强碳通量流向D‑泛酸的合成，通过削弱氮限制负调控转录因子，激活糖酵解前端基因拉动碳流，节约磷酸烯醇式丙酮酸及减少中心碳流进入TCA，得到一株无质粒、无抗生素添加用于产D‑泛酸的工程菌株。最终使得D‑泛酸摇瓶效价相对于出发菌株提升87.2％，达到5.43g/L；运用5‑L发酵罐发酵84小时，D‑泛酸产量能够达到94.2g/L。

公开(公告)号：CN116622609A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310695247.9

申请日：2023-06-13

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  张博 ,  贺周霖 ,  唐蒙娜 ,  肖云颖 ,  沈盼 ,  郑裕国

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/52 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/113 ,  C12P13/02 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明基于CRISPRi筛选技术来识别内源性基因靶点，提供一种高产D‑泛酸的基因工程菌及其构建方法，以及该基因工程菌在微生物发酵制备D‑泛酸中的应用。本发明证实CRISPRi筛选可以得到对DPA合成有益的基因靶点；运用CRISPRi技术，筛选识别内源性基因靶点大幅度提高基因工程菌D‑泛酸生物合成能力，菌株DPAP10/pdCas9gRNA‑gltA‑ptsH相对于原始菌株DPAP10，在摇瓶中DPA产量提高了49.5％达到5.3g/L；中间代谢物检测分析发现，改变丙酮酸通量分布和降低TCA循环速率，会导致碳流更多流向DPA合成代谢路径中，从而提高DPA的产量，这一发现为构建更高产菌株提供了新思路。