公开(公告)号：CN107058251A

公开(公告)日：2017-08-18

申请号：CN201710257065.8

申请日：2017-04-19

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  郑裕国 ,  吴林 ,  张晓建 ,  薛亚平 ,  王亚军

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种重组羰基还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位、第144位或第156位进行单点突变获得的。本发明提供一种具有还原(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的重组羰基还原酶突变体，该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，简化了繁琐的化学催化步骤，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。

公开(公告)号：CN114350630B

公开(公告)日：2023-07-14

申请号：CN202210111360.3

申请日：2022-01-29

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  杨青 ,  朱芳莹 ,  张晓建 ,  郑裕国 ,  马石金 ,  杜军 ,  吴慧

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 一种具有较好水溶性的L‑泛解酸内酯脱氢酶TpLPLDH、突变体及其编码基因，以及其在生物催化制备D‑泛酸前体中间物酮泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶TpLPLDH氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明有益效果主要体现在：本发明提供一种新的具有L‑泛解酸内酯脱氢酶活性的蛋白质，该蛋白质具有L‑泛解酸内酯脱氢酶的作用，能够催化L‑泛解酸内酯脱氢生成酮基泛解酸内酯，并且该蛋白质溶解性很好，在水性溶剂（例如磷酸缓冲液）中几乎全部溶解。本发明提供一种具有L‑泛解酸内酯脱氢酶活性的突变体，在终浓度为1mM的底物L泛解酸内酯的体系中于30℃，1200 rpm中反应30min后，该突变体相比于野生型对底物的转化率提高到1.84倍，酶活相比于野生型提高到1.12倍。

公开(公告)号：CN108486075B

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN201810151387.9

申请日：2018-02-14

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  郑裕国 ,  尹欢欢 ,  张晓建 ,  王亚军

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种重组羰基还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第145位和第152位进行组合突变获得的，所述突变点为：第145位苯丙氨酸突变为蛋氨酸和第152位苏氨酸突变为丝氨酸；第145位苯丙氨酸突变为酪氨酸、第152位苏氨酸突变为丝氨酸。本发明提供一种具有还原(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的重组羰基还原酶突变体，该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。

公开(公告)号：CN108486075A

公开(公告)日：2018-09-04

申请号：CN201810151387.9

申请日：2018-02-14

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  郑裕国 ,  尹欢欢 ,  张晓建 ,  王亚军

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12P7/62

CPC classification number: C12N9/0006 ,  C12P7/62 ,  C12Y101/01184

Abstract: 本发明公开了一种重组羰基还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第145位和第152位进行组合突变获得的，所述突变点为：第145位苯丙氨酸突变为蛋氨酸和第152位苏氨酸突变为丝氨酸；第145位苯丙氨酸突变为酪氨酸、第152位苏氨酸突变为丝氨酸。本发明提供一种具有还原(S)-6-氯-5-羟基-3-氧代己酸叔丁酯的重组羰基还原酶突变体，该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。

公开(公告)号：CN114350630A

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202210111360.3

申请日：2022-01-29

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  杨青 ,  朱芳莹 ,  张晓建 ,  郑裕国 ,  马石金 ,  杜军 ,  吴慧

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/04 ,  C12R1/19

Abstract: 一种具有较好水溶性的L‑泛解酸内酯脱氢酶TpLPLDH、突变体及其编码基因，以及其在生物催化制备D‑泛酸前体中间物酮泛解酸内酯中的应用。所述L‑泛解酸内酯脱氢酶TpLPLDH氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。本发明有益效果主要体现在：本发明提供一种新的具有L‑泛解酸内酯脱氢酶活性的蛋白质，该蛋白质具有L‑泛解酸内酯脱氢酶的作用，能够催化L‑泛解酸内酯脱氢生成酮基泛解酸内酯，并且该蛋白质溶解性很好，在水性溶剂（例如磷酸缓冲液）中几乎全部溶解。本发明提供一种具有L‑泛解酸内酯脱氢酶活性的突变体，在终浓度为1mM的底物L泛解酸内酯的体系中于30℃，1200 rpm中反应30min后，该突变体相比于野生型对底物的转化率提高到1.84倍，酶活相比于野生型提高到1.12倍。

公开(公告)号：CN107058251B

公开(公告)日：2020-10-09

申请号：CN201710257065.8

申请日：2017-04-19

Applicant: 浙江工业大学

Inventor： 柳志强 ,  郑裕国 ,  吴林 ,  张晓建 ,  薛亚平 ,  王亚军

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种重组羰基还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用，所述突变体是将SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位、第144位或第156位进行单点突变获得的。本发明提供一种具有还原(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑氧代己酸叔丁酯的重组羰基还原酶突变体，该突变体相比于野生型酶在转化上述反应时催化活力和底物耐受性大大提高，反应进程耗时明显缩短。相比于化学法制备(3R,5S)‑6‑氯‑3,5‑二羟基己酸叔丁酯，本发明提供的技术所得产品立体选择性高，简化了繁琐的化学催化步骤，反应条件更加温和，对设备要求低，降低了反应成本，且对环境友好。