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公开(公告)号：CN105039388B
公开(公告)日：2019-06-18
申请号：CN201510371359.4
申请日：2015-06-30
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒。在植物细胞中导入质粒载体的混合物，包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码单链负义植物病毒反基因组的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述单链负义植物病毒衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白，和（iii）可以抑制植物体内基因沉默的沉默抑制子蛋白的多核苷酸序列的一种或多种分离的核酸分子。质粒载体组合物导入植物细胞后可以大量产生重组植物负链RNA病毒；侵染性克隆能高效侵染至少一种以上的植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；利用侵染性克隆可有效用于植物负链RNA病毒的反向遗传学研究。
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公开(公告)号：CN104962580B
公开(公告)日：2018-04-27
申请号：CN201510371509.1
申请日：2015-06-30
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体，包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体，具有表达量高，表达稳定性好，可以插入较长的外源基因片段，且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点，可以用于表达多种外源蛋白，也可以用于制备动物疫苗，具有广阔的应用价值和应用前景。
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公开(公告)号：CN1212401C
公开(公告)日：2005-07-27
申请号：CN02159874.6
申请日：2002-12-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种植物病毒卫星DNAβ分子、侵染性克隆及表达载体制备方法。该植物病毒卫星DNA分子即赛葵黄脉病毒卫星DNAβ，全序列长1348bp，与双生病毒DNA-A序列无同源性，含有一段约115nt的保守区域，一个118aa的开放阅读框(即C1)及一段长度不一的A富含区。本发明还涉及赛葵黄脉病毒的侵染性克隆，可以利用该侵染性克隆进行病毒功能基因组研究。本发明还提供了利用该卫星DNAβ的构建表达载体及其制备方法。
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公开(公告)号：CN1180086C
公开(公告)日：2004-12-15
申请号：CN02159881.9
申请日：2002-12-24
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N15/83
Abstract: 本发明涉及一种植物DNA病毒侵染性载体的构建方法。以中国番茄黄化曲叶病毒云南分离物为材料对基因组DNA-A和一新型的卫星分子DNA β进行了侵染性克隆的构建，通过Overlap-PCR和酶切的方法获得两个正向重复的基因组，并插入到具有高度复制能力的植物表达载体，重组载体通过三亲交配的方法导入具有强感染力的农杆菌菌株，从而获得以农杆菌介导的对寄主植物具有高效感染能力的侵染性载体。本发明为病毒基因组结构与功能以及寄主与病毒之间的互作研究、外源蛋白的表达载体以及病毒诱导的基因沉默的植物功能基因组研究提供了成熟的方法和体系。
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公开(公告)号：CN1425678A
公开(公告)日：2003-06-25
申请号：CN02159874.6
申请日：2002-12-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种植物病毒卫星DNAβ分子、侵染性克隆及表达载体制备方法。该植物病毒卫星DNA分子即赛葵黄脉病毒卫星DNAβ，全序列长1348bp，与双生病毒DNA－A序列无同源性，含有一段约115nt的保守区域，一个118aa的开放阅读框(即C1)及一段长度不一的A富含区。本发明还涉及赛葵黄脉病毒的侵染性克隆，可以利用该侵染性克隆进行病毒功能基因组研究。本发明还提供了利用该卫星DNAβ的构建表达载体及其制备方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111849927A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010599526.1
申请日：2020-06-28
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N7/01
Abstract: 本发明公开了高效产生重组不分节段负义RNA病毒的方法及重组病毒，所述的方法包括向敏感细胞内导入或表达含有一种不分节段负义RNA病毒基因组的核酸分子，病毒核心蛋白核酸分子、以及双链RNA拮抗因子核酸分子。利用本发明提供的方法，可明显提高不分节段负义RNA病毒拯救效率。本发明还提供了利用所述方法对重组不分节段负义RNA病毒进行核酸置换、缺失、插入等遗传操作，构建侵染性重组病毒。
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公开(公告)号：CN105039388A
公开(公告)日：2015-11-11
申请号：CN201510371359.4
申请日：2015-06-30
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种重组单链负义植物病毒侵染性克隆构建方法及质粒和病毒。在植物细胞中导入质粒载体的混合物，包括（i）一种转录载体，所述转录载体包括一种分离的核酸分子，该核酸分子中含有编码单链负义植物病毒反基因组的多核苷酸序列，（ii）至少一种表达载体，包括编码所述单链负义植物病毒衣壳包装、转录和复制所必需的反式作用蛋白，和（iii）可以抑制植物体内基因沉默的沉默抑制子蛋白的多核苷酸序列的一种或多种分离的核酸分子。质粒载体组合物导入植物细胞后可以大量产生重组植物负链RNA病毒；侵染性克隆能高效侵染至少一种以上的植物，无需昂贵的仪器、操作简单、重复性好；利用侵染性克隆可有效用于植物负链RNA病毒的反向遗传学研究。
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公开(公告)号：CN1424400A
公开(公告)日：2003-06-18
申请号：CN02159881.9
申请日：2002-12-24
Applicant: 浙江大学
Abstract: 本发明涉及一种植物DNA病毒侵染性载体的构建方法。以中国番茄黄化曲叶病毒云南分离物为材料对基因组DNA－A和一新型的卫星分子DNAβ进行了侵染性克隆的构建，通过Overlap－PCR和酶切的方法获得两个正向重复的基因组，并插入到具有高度复制能力的植物表达载体，重组载体通过三亲交配的方法导入具有强感染力的农杆菌菌株，从而获得以农杆菌介导的对寄主植物具有高效感染能力的侵染性载体。本发明为病毒基因组结构与功能以及寄主与病毒之间的互作研究、外源蛋白的表达载体以及病毒诱导的基因沉默的植物功能基因组研究提供了成熟的方法和体系。
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公开(公告)号：CN115216486B
公开(公告)日：2024-04-16
申请号：CN202210424961.X
申请日：2022-04-21
Applicant: 浙江大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/55 , C12N15/113 , C12N5/10 , A01H4/00 , A01H5/00 , A01H6/82 , A01H6/54 , A01H6/60 , A01H6/34
Abstract: 本发明公开了一种利用负链RNA病毒载体对植物遗传物质进行定点修饰的方法及病毒载体系统。本发明提供了对植物基因组目的DNA进行定点编辑的方法，无需对待修饰的植物进行稳定的遗传转化，包括如下步骤：利用番茄斑萎病毒载体侵染植物并瞬时表达序列特异性的核酸修饰酶，所述序列特异性核酸修饰酶靶向所述被侵染植物基因组靶位点并切割或修饰靶位点，植物的DNA修复机制完成对所述靶位点的定向修饰。本发明利用RNA病毒载体递送序列特异性核酸修饰酶，不仅提高了对靶位点的编辑效率，而且可获得非转基因的编辑植株。
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公开(公告)号：CN117538535A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202311477324.X
申请日：2023-11-08
Applicant: 浙江大学山东(临沂)现代农业研究院
Abstract: 本发明公开了一种植物体内检测去泛素化修饰类型的方法，在植物体内建立检测蛋白去泛素化修饰类型的技术体系，为研究植物泛素化修饰和去泛素化修饰提供技术保障。
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