一种构建Fzd6基因敲除小鼠模型的方法及应用

    公开(公告)号:CN112899279B

    公开(公告)日:2023-02-14

    申请号:CN202110251526.7

    申请日:2021-03-08

    Applicant: 浙江大学

    Inventor: 李明定 韩海军

    Abstract: 本发明公开了一种构建Fzd6基因敲除小鼠模型的方法及应用,所述方法使用CRISPR/Cas9基因编辑技术,靶向Fzd6基因的第4个外显子,在对应位置设计并合成sgRNA,然后将体外转录的sgRNA/Cas9一起显微注射入小鼠的受精卵中,再将受精卵移植到假孕母鼠子宫中,获得F0代小鼠,然后通过PCR和测序鉴定阳性的小鼠,与野生型背景鼠回交后,获得单一基因型的杂合子小鼠,然后在杂合子小鼠之间杂交繁育获得纯合子小鼠,即所构建的Fzd6基因敲除小鼠,经测序发现其序列在目标位置发生5个碱基的缺失并导致移码突变,该模型小鼠可用于研究FZD6在所参与的癌症、神经发育、血液病及精神类疾病中的作用。

    用于检测肺癌驱动性基因突变的探针及试剂盒

    公开(公告)号:CN111154872A

    公开(公告)日:2020-05-15

    申请号:CN201911423840.8

    申请日:2019-12-31

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种用于检测肺癌驱动性基因突变的探针及检测试剂盒,包括BRAF、EGFR、KRAS、MET、NRAS和PIK3CA驱动性基因突变的探针及TP53和UGT1A1化疗药物相关基因的探针,共计276条探针。本发明提供的探针特异性高,准确性好,最低检测限可达0.1%。可为寻找靶向治疗药物的肺癌患者提供用药依据;还可以为治疗过程中发生严重毒副作用、耐药等的肺癌患者更换治疗方案。

    常温下一种粪便样本的DNA保存液及其制备方法和用途

    公开(公告)号:CN109609600A

    公开(公告)日:2019-04-12

    申请号:CN201910101292.0

    申请日:2019-01-31

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了常温下一种粪便样本的DNA保存液及其配制方法和用途。此保存液的主要成分包括以下几种:三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCl)缓冲液、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)、氯化钠(NaCl)和十二烷基硫酸钠(SDS)。该配方的优点是在常温下可以稳定粪便样本中微生物的构成,而且操作简便,只需将采集的新鲜粪便样本浸入此保存液中即可。本发明可用于常温条件下大规模的样本收集和运输。

    基于CRISPR/Cas9构建Fzd6-Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用

    公开(公告)号:CN112980880B

    公开(公告)日:2023-05-02

    申请号:CN202110251516.3

    申请日:2021-03-08

    Applicant: 浙江大学

    Inventor: 李明定 韩海军

    Abstract: 本发明公开了基于CRISPR/Cas9构建Fzd6‑Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用,通过比对发现不同物种中rs61753730所在的位置有一定的保守性,因此,在小鼠中靶向rs61753730所在的位置,即Q152E,设计并合成sgRNA、对应的引物以及Donor序列,构建sgRNA/Cas9表达载体,并将其线性化和纯化后进行体外转录,然后将sgRNA、Cas9mRNA以及Donor混合,一起显微注射到小鼠受精卵中,再将存活的受精卵移植到假孕母鼠子宫中,出生的小鼠为被编辑的F0代小鼠。经PCR和Sanger测序鉴定,将阳性的小鼠与野生型小鼠进行交配,获得F1代小鼠,最后将经鉴定为阳性的F1代杂合子小鼠进行交配,繁育所得后代即可获得纯合的Fzd6‑Q152E突变型和野生型的小鼠。该模型小鼠可用于研究rs61753730的生物学功能。

    Arvcf基因敲除动物模型的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN112980881A

    公开(公告)日:2021-06-18

    申请号:CN202110251519.7

    申请日:2021-03-08

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明涉及一种建立Arvcf基因敲除小鼠模型的方法及应用,所述小鼠模型是敲除了Arvcf基因中的七个外显子的小鼠,同时揭示了一种建立Arvcf基因敲除小鼠模型的方法。首先确定待敲除基因Arvcf的敲除区域,然后设计特异性的sgRNA和对应的引物并合成,再将构建好的sgRNA/Cas9载体线性化并纯化后进行体外转录,最后通过显微注射一起注射入小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠子宫进行Arvcf基因敲除小鼠模型的建立。收集所获得的子代小鼠的尾巴并抽提DNA,使用两对引物通过两次PCR反应以及测序以确认所获得的小鼠为野生型或敲除Arvcf基因目的区域的纯合或杂合型小鼠。该基因敲除小鼠模型可用于研究ARVCF在所参与的精神类疾病中的作用。

    Arvcf基因敲除动物模型的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN112980881B

    公开(公告)日:2022-07-19

    申请号:CN202110251519.7

    申请日:2021-03-08

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明涉及一种建立Arvcf基因敲除小鼠模型的方法及应用,所述小鼠模型是敲除了Arvcf基因中的七个外显子的小鼠,同时揭示了一种建立Arvcf基因敲除小鼠模型的方法。首先确定待敲除基因Arvcf的敲除区域,然后设计特异性的sgRNA和对应的引物并合成,再将构建好的sgRNA/Cas9载体线性化并纯化后进行体外转录,最后通过显微注射一起注射入小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠子宫进行Arvcf基因敲除小鼠模型的建立。收集所获得的子代小鼠的尾巴并抽提DNA,使用两对引物通过两次PCR反应以及测序以确认所获得的小鼠为野生型或敲除Arvcf基因目的区域的纯合或杂合型小鼠。该基因敲除小鼠模型可用于研究ARVCF在所参与的精神类疾病中的作用。

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