公开(公告)号：CN106318896B

公开(公告)日：2019-12-24

申请号：CN201610708676.5

申请日：2016-08-23

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 林二培 ,  唐佳妮 ,  楼雄珍 ,  黄华宏 ,  童再康

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种杉木原生质体制备及纯化方法。选取杉木组培苗最上部未分轮的叶片或幼嫩茎段；将叶片或茎段切断，放入酶解液中，抽真空，置于水平摇床上黑暗酶解2‑4h；用孔径70μm的细胞筛将酶解液过滤至离心管中，用原生质体清洗液清洗酶解后的叶片或茎段，用70μm的细胞筛进行过滤，滤液合并至同一离心管中，离心去上清；向沉淀中加入预冷的所述原生质体清洗液清洗原生质体，离心去上清后重复洗一次，收集的沉淀用原生质体重悬液重悬，得到纯化的杉木原生质体。本发明得到杉木叶片原生质体的产量为1.8×106个/g，活力为94％；杉木茎段原生质体的产量为8.9×105个/g，活力为86.5％，获得的原生质体产量大、活力高。

公开(公告)号：CN106318896A

公开(公告)日：2017-01-11

申请号：CN201610708676.5

申请日：2016-08-23

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 唐佳妮 ,  林二培 ,  楼雄珍 ,  黄华宏 ,  童再康

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种杉木原生质体制备及纯化方法。选取杉木组培苗最上部未分轮的叶片或幼嫩茎段；将叶片或茎段切断，放入酶解液中，抽真空，置于水平摇床上黑暗酶解2-4h；用孔径70μm的细胞筛将酶解液过滤至离心管中，用原生质体清洗液清洗酶解后的叶片或茎段，用70μm的细胞筛进行过滤，滤液合并至同一离心管中，离心去上清；向沉淀中加入预冷的所述原生质体清洗液清洗原生质体，离心去上清后重复洗一次，收集的沉淀用原生质体重悬液重悬，得到纯化的杉木原生质体。本发明得到杉木叶片原生质体的产量为1.8×106个/g，活力为94％；杉木茎段原生质体的产量为8.9×105个/g，活力为86.5％，获得的原生质体产量大、活力高。