公开(公告)号：CN101914553A

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN201010237654.8

申请日：2010-07-27

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 姚四新 ,  刘兴友 ,  赵淑秋 ,  刘金华 ,  李学斌 ,  王丽荣 ,  王宪文 ,  王自良 ,  赵坤 ,  张兆沛

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/10 ,  C07K14/165 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00

Abstract: 本发明涉及一种鸭源性冠状病毒M蛋白基因。其具有SEQ ID No.3、4所示的核苷酸序列和氨基酸序列；其克隆方法为：选取鸭源性冠状病毒ZZ2004株，以5′-GTCGCTAGAGGAGAATGGTA-3′为上游引物，以5′-ATACGCTTCCGTGCTCTTA-3′为下游引物；通过RT-PCR的方法扩增出鸭源性冠状病毒膜蛋白基因全长片段，再与pMD18-T载体连接。与同类冠状病毒相比，ZZ2004变异的程度较大，感染谱更广，对其膜蛋白基因结构研究，从分子生物学水平上揭示其流行、变异规律，对于研制开发有效基因工程亚单位蛋白疫苗及防治IB的药物，进而预防和控制IB的发生与流行有着重要的意义。

公开(公告)号：CN101906404A

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN201010225577.4

申请日：2010-07-14

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 刘兴友 ,  姚四新 ,  赵淑秋 ,  刘金华 ,  王宪文 ,  王丽荣 ,  王自良 ,  赵坤 ,  陈仕钧 ,  赵朴

IPC: C12N7/00 ,  A61K39/215 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及鸭源性冠状病毒ZZ2004及其分离培养方法与应用。其微生物保藏编号为CGMCC No.3842；其分离培养方法：无菌条件下采集感染发病的家禽肾脏，加灭菌PBS反复洗涤后，研磨至乳状再加灭菌PBS稀释液后，分装入冻存管，反复冻融数次，过滤除菌，将滤液经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，37℃培养72h，收获尿囊液并连续盲传5代以上，取红细胞凝集试验为阴性的鸡胚尿囊液。本病毒分离株来源于鸡鸭混养的养殖场，与其它禽类的冠状病毒相比，其变异程度大，对动物的感染谱更广，本病毒的发现与研究对于揭示IBV变异规律，区分不同的血清型，制备出防治鸡传染性支气管炎的新型IBV疫苗与药物，有着重要的意义。

公开(公告)号：CN101948851A

公开(公告)日：2011-01-19

申请号：CN201010264748.4

申请日：2010-08-27

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 刘兴友 ,  姚四新 ,  赵淑秋 ,  刘金华 ,  王宪文 ,  王丽荣 ,  王自良 ,  赵坤 ,  王三虎 ,  王青

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/10 ,  C07K14/165 ,  A61K48/00 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00

Abstract: 本发明涉及一种鸭源性冠状病毒ZZ2004的N蛋白基因及其克隆方法与应用。该N蛋白基因序列全长1230bp，编码409个氨基酸残基的N蛋白；通过随机PCR找到与其同源性较高的病毒序列，以该序列为模版设计1对特异性引物扩增出对应的片段，再将其分别与pMD18-T载体连接即克隆出该病毒N蛋白基因。鉴于N基因是重要的免疫基因，在细胞免疫及体液免疫方面均具有重要作用，在局部免疫方面也具有重要作用，本发明对N基因的研究，有助于揭示IBV变异规律，区分不同的血清型，进而研制备出新型高效的基因工程疫苗，为有效防制IBV将起到重要作用。

公开(公告)号：CN101906404B

公开(公告)日：2012-09-05

申请号：CN201010225577.4

申请日：2010-07-14

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 刘兴友 ,  姚四新 ,  赵淑秋 ,  刘金华 ,  王宪文 ,  王丽荣 ,  王自良 ,  赵坤 ,  陈仕钧 ,  赵朴

IPC: C12N7/00 ,  A61K39/215 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及鸭源性冠状病毒ZZ2004及其分离培养方法与应用。其微生物保藏编号为CGMCC NO.3842；其分离培养方法：无菌条件下采集感染发病的家禽肾脏，加灭菌PBS反复洗涤后，研磨至乳状再加灭菌PBS稀释液后，分装入冻存管，反复冻融数次，过滤除菌，将滤液经尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚，37℃培养72h，收获尿囊液并连续盲传5代以上，取红细胞凝集试验为阴性的鸡胚尿囊液。本病毒分离株来源于鸡鸭混养的养殖场，与其它禽类的冠状病毒相比，其变异程度大，对动物的感染谱更广，本病毒的发现与研究对于揭示IBV变异规律，区分不同的血清型，制备出防治鸡传染性支气管炎的新型IBV疫苗与药物，有着重要的意义。

公开(公告)号：CN101962648A

公开(公告)日：2011-02-02

申请号：CN201010264772.8

申请日：2010-08-27

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 刘兴友 ,  姚四新 ,  赵淑秋 ,  王宪文 ,  刘金华 ,  王丽荣 ,  王自良 ,  赵坤 ,  王三虎 ,  王青

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/10 ,  C07K14/165 ,  A61K48/00 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00

Abstract: 本发明公开了一种鸭源性冠状病毒ZZ2004的ORF1a蛋白基因及其克隆方法与应用。该ORF1a蛋白基因序列11859bp，编码3952个氨基酸残基的ORF1a蛋白；通过随机PCR找到与其同源性较高的病毒序列，以该序列为模版设计12对特异性引物扩增出对应的片段，再将ORF1a蛋白基因片段分别与pMD18-T载体连接。鉴于IBV ORF1a蛋白具有RNA聚合酶的活性，同时本病毒的感染谱明显不同于其它毒株，所以对ORF1a蛋白基因的研究IBV，进而从分子水平上揭示IBV的流行和变异机制，研制出IBV核酸疫苗、活载体疫苗及防治鸡传染性支气管炎药物，对于预防和控制IB的发生与流行有着重要的意义。

公开(公告)号：CN101914554A

公开(公告)日：2010-12-15

申请号：CN201010237670.7

申请日：2010-07-27

Applicant: 河南科技学院

Inventor： 刘兴友 ,  姚四新 ,  赵淑秋 ,  刘金华 ,  王宪文 ,  王丽荣 ,  王自良 ,  赵坤 ,  王青 ,  赵朴

IPC: C12N15/50 ,  C12N15/10 ,  C07K14/165 ,  A61K39/215 ,  A61P31/14 ,  A61P11/00

Abstract: 本发明涉及一种鸭源性冠状病毒S1蛋白基因。其具有SEQ ID No.5、6所示的基因序列；其克隆方法为：选取鸭源性冠状病毒ZZ2004株，以5′-GACTGAACAAAAGACCGACT-3′为上游引物，以5′-GCCATCGCTCTTAGTAACAT-3′为下游引物；以5′-GGTGGCTCTCGTATACAAAC-3′为上游引物，以5′-GCAGTAATACCACCAAAAGC-3′为下游引物；RT-PCR扩增S1蛋白基因全长片段，再与pMD18-T载体连接。与同类冠状病毒相比，该病毒变异程度大、感染谱广，研究其S1蛋白基因结构，对于研制开发基因工程亚单位蛋白疫苗及防治药物，进而防控IB的发生与流行有着重要意义。