公开(公告)号：CN102140450B

公开(公告)日：2013-07-31

申请号：CN201110001717.4

申请日：2011-01-06

Applicant: 河南科技大学

Inventor： 郭大龙 ,  侯小改 ,  刘崇怀 ,  郑玉萍 ,  魏素玲 ,  贾甜

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 分离反转录转座子长末端重复序列的方法，以基因组DNA作为模版，利用RNaseH1引物分别与不同的退火控制引物组合进行第一次PCR反应，后通过第一次的PCR产物进行稀释，做为模板，使用RNaseH2引物与通用引物UP进行第二次PCR反应扩增，进行转化、质粒DNA的提取，进行序列测序，得到RNaseH酶的氨基酸序列，并编码蛋白。本方法相对于普通PCR技术具有操作简单，易直接瞄准反转录转座子长末端重复序列区,针对性强,与流式磁珠反向杂交法相比，免去杂交、洗脱、筛选等过程,流程简化，且效率高，与其它的分离方法相比，减少时间消耗、快速获得目的片段，在较短时间内将长末端重复序列克隆，减少假阳性率的发生。

公开(公告)号：CN102140450A

公开(公告)日：2011-08-03

申请号：CN201110001717.4

申请日：2011-01-06

Applicant: 河南科技大学

Inventor： 郭大龙 ,  侯小改 ,  刘崇怀 ,  郑玉萍 ,  魏素玲 ,  贾甜

IPC: C12N15/10 ,  C12Q1/68

Abstract: 分离反转录转座子长末端重复序列的方法，以基因组DNA作为模版，利用RNaseH1引物分别与不同的退火控制引物组合进行第一次PCR反应，后通过第一次的PCR产物进行稀释，做为模板，使用RNaseH2引物与通用引物UP进行第二次PCR反应扩增，进行转化、质粒DNA的提取，进行序列测序，得到RNaseH酶的氨基酸序列，并编码蛋白。本方法相对于普通PCR技术具有操作简单，易直接瞄准反转录转座子长末端重复序列区,针对性强,与流式磁珠反向杂交法相比，免去杂交、洗脱、筛选等过程,流程简化，且效率高，与其它的分离方法相比，减少时间消耗、快速获得目的片段，在较短时间内将长末端重复序列克隆，减少假阳性率的发生。