公开(公告)号：CN118667931A

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202410843802.2

申请日：2024-06-27

Applicant: 河北大学 ,  河北大学附属医院

Inventor： 张江艳 ,  张洺华 ,  谢志欣 ,  成永强 ,  王彦

IPC: C12Q1/6862

Abstract: 本发明属于分子检测诊断技术领域，具体涉及一种连接反应结合连接酶链式反应检测RNA标志物的“一锅法”检测方法。本发明所述检测方法包括以下步骤：首先，用乙二醛笼蔽连接探针对2以及MNAzyme的Partzyme A和Partzyme B；然后，将包括目标RNA标志物、与目标RNA标志物互补的连接探针对1、被笼蔽的连接探针对2、被笼蔽的Partzyme A和Partzyme B、SplintR连接酶、耐热DNA连接酶、缓冲液和信号探针在内的反应试剂一次性加入到同一反应管中，进行“一锅法”反应，获得实时扩增曲线。本发明检测方法兼备了以RNA为模板的连接反应、LCR扩增以及MNAzyme识别靶核酸的高特异性，实现了对RNA标志物的实时检测；具有简化操作、减少污染风险等方面的优势，为分子生物学研究和临床实验提供了一种更为简便的RNA检测方法。

公开(公告)号：CN118667930A

公开(公告)日：2024-09-20

申请号：CN202410843728.4

申请日：2024-06-27

Applicant: 河北大学

Inventor： 张江艳 ,  景朝迪 ,  成永强 ,  谢志欣

IPC: C12Q1/6862

Abstract: 本发明属于分子检测诊断技术领域，具体涉及一种不对称连接酶链式反应结合多组分核酸酶实时定量检测核酸的方法。本发明根据目标核酸设计两对连接探针和两个Partzyme；以DNA核酸为模板及/或以RNA核酸经连接反应生成的长链DNA为模板，在DNA连接酶的作用下进行不对称连接酶链式反应（LCR），生成含有单链DNA的LCR产物；两个Partzyme识别单链DNA，组装形成有活性的MNAzyme并切割信号探针，实时监测切割所产生的荧光信号，实现目标核酸的实时定量检测。本发明提供了一种新的LCR实时检测方法，同时兼备LCR的特异性连接和MNAzyme的双特异性识别特性，特异性好，并且具有实现多重检测的潜力。

公开(公告)号：CN115247206B

公开(公告)日：2024-12-20

申请号：CN202111227385.1

申请日：2021-10-21

Applicant: 河北大学

Inventor： 成永强 ,  闫新荣 ,  张江艳

IPC: C12Q1/6862

Abstract: 本发明提供了一种基于连接酶链式反应和基因编辑技术检测核酸标志物的方法，包括以下步骤：（a）根据目标核酸标志物的序列，设计两对用于连接酶链式反应的DNA探针；其中，第一对DNA探针与目标核酸标志物互补，第二对DNA探针与第一对DNA探针序列互补，在DNA探针上设计有PAM序列；（b）将待检测核酸与两对DNA探针混合，并加入连接酶进行连接酶链式反应；（c）在连接产物中加入gRNA、CRISPR/Cas12系统以及报告探针，CRISPR/Cas12系统被激活后切割报告探针并释放荧光信号。本发明开创性地将LCR反应和CRISPR/Cas12a结合，实现了核酸标志物的均相、超灵敏检测。

公开(公告)号：CN115247206A

公开(公告)日：2022-10-28

申请号：CN202111227385.1

申请日：2021-10-21

Applicant: 河北大学

Inventor： 成永强 ,  闫新荣 ,  张江艳

IPC: C12Q1/6862

Abstract: 本发明提供了一种基于连接酶链式反应和基因编辑技术检测核酸标志物的方法，包括以下步骤：（a）根据目标核酸标志物的序列，设计两对用于连接酶链式反应的DNA探针；其中，第一对DNA探针与目标核酸标志物互补，第二对DNA探针与第一对DNA探针序列互补，在DNA探针上设计有PAM序列；（b）将待检测核酸与两对DNA探针混合，并加入连接酶进行连接酶链式反应；（c）在连接产物中加入gRNA、CRISPR/Cas12系统以及报告探针，CRISPR/Cas12系统被激活后切割报告探针并释放荧光信号。本发明开创性地将LCR反应和CRISPR/Cas12a结合，实现了核酸标志物的均相、超灵敏检测。

公开(公告)号：CN117686713A

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202311691565.4

申请日：2023-12-11

Applicant: 河北大学

Inventor： 成永强 ,  代卉 ,  张江艳

IPC: G01N33/574 ,  G01N33/58 ,  C12Q1/34 ,  C12Q1/40 ,  C12Q1/54

Abstract: 本发明提供了一种基于酪胺信号放大技术与血糖仪的免疫检测方法，属于分子诊断检测技术领域。所述检测方法为：首先，通过酰胺缩合反应和点击化学反应制备酪胺‑特异酶偶联物，并通过抗原‑抗体的特异结合作用，引入辣根过氧化物酶或具有类过氧化物酶活性的材料作为催化剂；然后基于酪胺信号放大技术沉积酪胺‑特异酶偶联物；最后，应用血糖仪对目标分析物的浓度进行检测。本发明开创性地将酪胺信号放大技术与便携式血糖仪结合，显著提高了免疫反应的灵敏度，可实现微痕量蛋白及其它基于免疫反应的物质的高灵敏度检测。方法操作简便，成本低，不需要昂贵精密仪器和专业技术人员，尤其适用于资源缺乏及无实验室条件的地区。