公开(公告)号：CN113201585A

公开(公告)日：2021-08-03

申请号：CN202110291647.4

申请日：2021-03-18

Applicant: 江苏开放大学(江苏城市职业学院)

Inventor： 彭双 ,  王一明 ,  宋丹 ,  周贝贝 ,  魏翠兰

IPC: C12Q1/6851 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/10 ,  C12Q1/06 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明提供基于荧光定量PCR技术定量检测大肠杆菌O157:H7的方法，该方法包括：(1)提取样本的微生物基因组DNA；(2)将所述基因组DNA放入PCR反应管中，并向管中加入正向引物、反向引物、SYBR Green Reaction Mix、ROX和无菌水，对标准对照液和待测样品同时进行PCR扩增和熔解曲线测定，获得大肠杆菌O157:H7实时定量PCR的Ct值，根据标准对照液的Ct值和拷贝数拟合的标准曲线，即可定量检测大肠杆菌O157:H7。本发明稳定性良好、灵敏度高、特异性强，与土壤和粪便中的其他细菌无交叉反应，能够在1.5小时之内对土壤和畜禽粪便中大肠杆菌O157:H7进行定量检测。

公开(公告)号：CN112980976A

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN202110292532.7

申请日：2021-03-18

Applicant: 江苏开放大学(江苏城市职业学院)

Inventor： 彭双 ,  王一明 ,  宋丹 ,  周贝贝 ,  魏翠兰

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/6851 ,  C12Q1/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种采用荧光定量PCR技术定量检测土壤中大肠杆菌O157:H7的方法，该方法包括(1)提取样本的微生物基因组DNA；(2)将所述基因组DNA放入PCR反应管中，并向管中加入正向引物、反向引物、SYBR Green Reaction Mix、ROX和无菌水，对标准对照液和未知样品同时进行PCR扩增和熔解曲线测定，获得大肠杆菌O157:H7实时定量PCR的Ct值，根据标准对照液的Ct值和拷贝数拟合的标准曲线，即可定量检测未知样品中的大肠杆菌O157:H7，特异性高，准确度强，最低检测DNA浓度为1.5×10‑4ng/μL，可有效解决土壤和粪便中大肠杆菌O157:H7定量检测的问题。