公开(公告)号：CN101701211B

公开(公告)日：2012-05-23

申请号：CN200910235070.4

申请日：2009-11-13

Applicant: 江苏大学

Inventor： 谭小力 ,  魏明玉 ,  袁伟伟 ,  王政 ,  张志燕

IPC: C12N9/20

Abstract: 本发明一种高效提取纯化油菜脂肪酶的方法，按照下述步骤进行：(1)确定油菜最佳提取脂肪酶时间：(2)将提取的粗酶液边搅拌边向其中加入固体硫酸铵，将蛋白质沉淀用蒸馏水溶解得到盐析液，该条件下脂肪酶的回收率为93.49％，纯化倍数达到1.06；(3)然后选用截留分子量为100000Da的超滤膜对脂肪酶盐析液进行浓缩；(4)采用离子交换柱层析纯化超滤液中脂肪酶，得到油菜脂肪酶蛋白，纯度分别为3.13u/mg和9.14u/mg，总回收率为43.94％。本发明提供的油菜脂肪酶纯化过程中，区别于微生物脂肪酶分离纯化工艺，采用液氮研磨破碎植物细胞壁，溶解植物细胞质内脂肪酶和植物细胞膜内脂肪酶，提供了一种提取纯化植物细胞内分泌脂肪酶的方法，纯度高，回收率高，酶纯化倍数为4.83。

公开(公告)号：CN101701211A

公开(公告)日：2010-05-05

申请号：CN200910235070.4

申请日：2009-11-13

Applicant: 江苏大学

Inventor： 谭小力 ,  魏明玉 ,  袁伟伟 ,  王政 ,  张志燕

IPC: C12N9/20

Abstract: 本发明一种高效提取纯化油菜脂肪酶的方法，按照下述步骤进行：(1)确定油菜最佳提取脂肪酶时间；(2)将提取的粗酶液边搅拌边向其中加入固体硫酸铵，将蛋白质沉淀用蒸馏水溶解得到盐析液，该条件下脂肪酶的回收率为93.49％，纯化倍数达到1.06；(3)然后选用截留分子量为100000Da的超滤膜对脂肪酶盐析液进行浓缩；(4)采用离子交换柱层析纯化超滤液中脂肪酶，得到油菜脂肪酶蛋白，纯度分别为3.13u/mg和9.14u/mg，总回收率为43.94％。本发明提供的油菜脂肪酶纯化过程中，区别于微生物脂肪酶分离纯化工艺，采用液氮研磨破碎植物细胞壁，溶解植物细胞质内脂肪酶和植物细胞膜内脂肪酶，提供了一种提取纯化植物细胞内分泌脂肪酶的方法，纯度高，回收率高，酶纯化倍数为4.83。