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公开(公告)号：CN118147186A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410408832.0
申请日：2024-04-07
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种广盐性嗜盐古菌蛋白酶C端延伸突变体的制备方法及其应用；步骤为：以嗜盐古菌的基因组为模板，通过Overlap PCR技术获得HlyAHap与HlyBHap的CTE融合表达蛋白的编码基因hlyAHap‑hlyBHapCTE，记为hlyAHap‑CTE，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。然后将hlyAHap‑CTE连接到载体上构建重组质粒，并将其转化原核宿主，诱导表达后对其进行镍亲和层析纯化和透析复性，孵育后得到嗜盐古菌蛋白酶C端延伸突变体，记为HlyAHap‑CTE。本发明得到了稳定性良好的广盐性蛋白酶，可以作为生物催化剂广泛应用于食品、医药、化工等工业领域。
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公开(公告)号：CN110862978A
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201910938849.6
申请日：2019-09-30
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种重组嗜盐古菌蛋白酶的制备方法；步骤为：以Halostella sp.DL-M4的基因组为模板，pET28a质粒为表达载体构建重组质粒；重组质粒转化大肠杆菌细胞，诱导表达，离心收集菌体进行细胞重悬及破碎，再次离心取上清液，加入β-巯基乙醇得到混合液过镍柱，酶原与镍介质结合复性，最后经二次除杂蛋白及目标蛋白洗脱、超滤离心浓缩、凝胶过滤层析，得到重组嗜盐古菌蛋白酶；本发明具有良好的通用性，纯化步骤更简单，生产周期更短，获得的蛋白酶纯度高，最终获得比酶活为1159.15U/mg的嗜盐古菌蛋白酶。
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公开(公告)号：CN116445437A
公开(公告)日：2023-07-18
申请号：CN202310421084.5
申请日：2023-04-19
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种新型嗜盐古菌硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：将构建的重组质粒pTA04‑nasHor转化原核宿主，扩大培养后离心收集菌体；超声破碎裂解细胞，离心后收集上清用于后续纯化；经镍柱亲和层析纯化和超滤浓缩后，得到NasHor，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；NasHor具有优良的酶学特性，尤其是对盐度、温度、pH均具有广适性，并且具有较佳的盐度、温度、pH稳定性，同时对金属离子和有机溶剂具良好的耐受性。NasHor可应用于腌制蔬菜和污水中硝酸盐的降解，为高温、高盐、碱性等环境中的硝酸盐降解提供了一种新型酶制剂，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN111705050B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202010425190.7
申请日：2020-05-19
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种新型嗜盐古菌胞外蛋白酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌DYF 46的基因组获得编码基因hly；通过分子克隆技术将hly连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化原核生物宿主，得到转化后的重组宿主细胞在含有卡那霉素的LB液体培养基中培养，经培养、诱导表达后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化蛋白结合柱上复性方法获得成熟酶，经凝胶过滤层析纯化后获得高纯度Hly。本发明得到的Hly具有优良的酶学特性，可应用于洗涤剂、废水处理、制药和环境修复等复杂、含盐的降解蛋白质的生产加工过程中。
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公开(公告)号：CN110862978B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN201910938849.6
申请日：2019-09-30
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种重组嗜盐古菌蛋白酶的制备方法；步骤为：以Halostella sp.DL‑M4的基因组为模板，pET28a质粒为表达载体构建重组质粒；重组质粒转化大肠杆菌细胞，诱导表达，离心收集菌体进行细胞重悬及破碎，再次离心取上清液，加入β‑巯基乙醇得到混合液过镍柱，酶原与镍介质结合复性，最后经二次除杂蛋白及目标蛋白洗脱、超滤离心浓缩、凝胶过滤层析，得到重组嗜盐古菌蛋白酶；本发明具有良好的通用性，纯化步骤更简单，生产周期更短，获得的蛋白酶纯度高，最终获得比酶活为1159.15U/mg的嗜盐古菌蛋白酶。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114134125A
公开(公告)日：2022-03-04
申请号：CN202110593384.2
申请日：2021-05-28
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种新型嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌(Haloterrigena sp.)KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后，获得高纯度还原酶，记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性，高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。
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公开(公告)号：CN118165961A
公开(公告)日：2024-06-11
申请号：CN202410393850.6
申请日：2024-04-02
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种新型嗜盐古菌氨肽酶的制备方法及其应用；步骤为：将重组质粒pTA04‑apHap转化原核宿主并表达；超声破碎裂解细胞，离心收集上清用于后续纯化；经镍柱亲和层析纯化后，得到APHap，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。APHap具有优良的酶学特性，尤其是对盐度、温度、pH均具有广适性和稳定性，同时对金属离子、有机溶剂及表面活性剂具有良好的耐受性。APHap可应用于高盐发酵食品中蛋白质N端氨基酸的水解，提高水解液中游离氨基酸的含量，同时可以脱除高盐发酵食品中的苦味，为高盐发酵食品行业提供了一种新型酶制剂。
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公开(公告)号：CN114807203B
公开(公告)日：2024-03-19
申请号：CN202210338020.4
申请日：2022-04-01
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用；步骤为：将重组质粒pET28a‑hlyA转化原核宿主，诱导表达得嗜盐古菌蛋白酶，对其进行纯化和复性，孵育后得到高纯度的嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体HlyA△CTE，其氨基酸序列为HlyA的成熟酶序列缺少了CTE结构域(SEQ ID No.1)。HlyA△CTE具有优良的酶学特性，尤其是在高温、低盐、高盐、碱性等环境下均具有良好的稳定性；同时HlyA△CTE可用于催化蛋白类底物水解，包括对偶氮酪蛋白为代表的大分子蛋白质底物的催化作用，具体应用于鱼露发酵中促进对鱼蛋白的水解，为高盐、高温等环境中的蛋白降解提供新型酶制剂。
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公开(公告)号：CN114134125B
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202110593384.2
申请日：2021-05-28
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌(Haloterrigena sp.)KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后，获得高纯度还原酶，记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性，高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。
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公开(公告)号：CN114807203A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210338020.4
申请日：2022-04-01
Applicant: 江苏大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体的制备方法及其应用；步骤为：将重组质粒pET28a‑hlyA转化原核宿主，诱导表达得嗜盐古菌蛋白酶，对其进行纯化和复性，孵育后得到高纯度的嗜盐古菌胞外蛋白酶截短体HlyA△CTE，其氨基酸序列为HlyA的成熟酶序列缺少了CTE结构域(SEQ ID No.1)。HlyA△CTE具有优良的酶学特性，尤其是在高温、低盐、高盐、碱性等环境下均具有良好的稳定性；同时HlyA△CTE可用于催化蛋白类底物水解，包括对偶氮酪蛋白为代表的大分子蛋白质底物的催化作用，具体应用于鱼露发酵中促进对鱼蛋白的水解，为高盐、高温等环境中的蛋白降解提供新型酶制剂。
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