公开(公告)号：CN115093469A

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN202210263568.7

申请日：2022-03-17

Applicant: 江苏农林职业技术学院

Inventor： 徐云明 ,  陈益 ,  卜永谦 ,  孙智远 ,  杨剑波 ,  卞蓉蓉

IPC: C07K14/255 ,  C07K1/26 ,  C12N15/31 ,  C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种体外原核表达肠道沙门氏菌avrA蛋白的方法。本发明所述的方法包括以下步骤：(S1)设计沙门氏菌的avrA基因的引物，进行avrA基因体外扩增；(S2)重组载体的构建：将扩增后的avrA基因与通过BamH I酶切位点和XhoI酶切位点双酶切后的pGEX‑4T‑1质粒大片段进行重组，得到重组载体pGEX‑4T‑1‑avrA质粒；(S3)重组菌的构建：将步骤(S2)得到的重组载体转化进感受态细胞中；所述的感受态细胞分别为BL21和Rosetta 2表达菌种；(S4)avrA蛋白的诱导表达：将步骤(S3)得到的重组菌在培养基中培养，将适当浓度的IPTG加入培养基中，诱导avrA蛋白表达。本发明实现了avrA蛋白在细菌裂解上清液中表达，使avrA蛋白的活性及功能更接近原始状态。