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公开(公告)号：CN105671070A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610122595.7
申请日：2016-03-03
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
CPC classification number: C12N15/75 , C07K14/32 , C12N2800/80 , C12N2999/007
Abstract: 本发明公开了一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明构建敲除质粒PHY300dsrf，该质粒包含特异性靶向目的基因的sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制原点及抗性筛选标记。本发明所设计的特异性靶向srfA-C基因的sgRNA，可以指引cas9蛋白在srfA-C基因的特异性位点切割双链，然后再同源修复臂的指导下对基因组进行精确地同源性重组，在断裂处引入XhoI酶切位点。在对srfA-C基因敲除成功的枯草芽孢杆菌进行上罐发酵培养，泡沫显著减少，证明该CRISPR/Cas9基因编辑系统可以有效的对枯草芽孢杆菌基因组进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN105671070B
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201610122595.7
申请日：2016-03-03
Applicant: 江南大学 , 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了一种用于枯草芽孢杆菌基因组编辑的CRISPRCas9系统及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明构建敲除质粒PHY300dsrf，该质粒包含特异性靶向目的基因的sgRNA、cas9基因、同源修复臂、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的复制原点及抗性筛选标记。本发明所设计的特异性靶向srfA‑C基因的sgRNA，可以指引cas9蛋白在srfA‑C基因的特异性位点切割双链，然后再同源修复臂的指导下对基因组进行精确地同源性重组，在断裂处引入XhoI酶切位点。在对srfA‑C基因敲除成功的枯草芽孢杆菌进行上罐发酵培养，泡沫显著减少，证明该CRISPR/Cas9基因编辑系统可以有效的对枯草芽孢杆菌基因组进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN106367377B
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201610842031.0
申请日：2016-09-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种蔗糖异构酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明以重组短小芽孢杆菌为生产菌株，生产蔗糖异构酶，然后进行固定化，固定化后的酶活为35.2U/g，酶活力回收率达70.3％。固定化酶的最适温度为40℃(游离酶为30℃)，最适pH为4.5(游离酶为6.0)，表明固定化酶具有更好的温度、pH耐受性。以600g·L‑1的蔗糖浓度为底物，异麦芽酮糖最大产物得率可以达到87.8％。在最佳的转化条件下连续转化16次，产物得率仍有87.52％，显示该固定化酶具有良好的操作稳定性及较高的异麦芽酮糖合成能力。该固定化方法操作简单易行，成本低廉，为工业化应用提供参考。
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公开(公告)号：CN102876650B
公开(公告)日：2014-06-18
申请号：CN201210256804.9
申请日：2012-07-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高比活和高热稳定性普鲁兰酶突变体及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过定点突变提高了普鲁兰酶比活力和热稳定性，提供了能够使来源于脱支芽孢杆菌的普鲁兰酶催化比活力及热稳定性都得到提高的突变方案。所述普鲁兰酶突变体，至少以下性质之一发生改变：1）最适反应温度提高；2）在pH4.0-5.0热稳定性提高；3）在pH4.0-5.0比活力提高。这些突变体比野生型普鲁兰酶更适用于淀粉糖化生产过程。
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公开(公告)号：CN102876650A
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201210256804.9
申请日：2012-07-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种具有高比活和高热稳定性普鲁兰酶突变体及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明通过定点突变提高了普鲁兰酶比活力和热稳定性，提供了能够使来源于脱支芽孢杆菌的普鲁兰酶催化比活力及热稳定性都得到提高的突变方案。所述普鲁兰酶突变体，至少以下性质之一发生改变：1）最适反应温度提高；2）在pH4.0-5.0热稳定性提高；3）在pH4.0-5.0比活力提高。这些突变体比野生型普鲁兰酶更适用于淀粉糖化生产过程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105238717B
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201510691439.8
申请日：2015-10-21
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/20 , C12N9/24 , A23L33/195 , C12P19/22 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一种高产β‑淀粉酶的弯曲芽孢杆菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明的弯曲芽孢杆菌于2015年6月14保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 2015368。本发明的弯曲芽孢杆菌，β‑淀粉酶活达到121U/mL，其生产的β‑淀粉酶的最适pH7.0、最适温度为50℃、在50℃条件下半衰期可达26h。利用本发明的β‑淀粉酶以10％马铃薯淀粉液化液为底物，在pH6.0，50℃条件下与普鲁蓝酶复配进行糖化，主要产物为麦芽糖和麦芽三糖，糖化24h麦芽糖转化率超过75％，可用于高麦芽糖浆制备、啤酒等食品发酵行业。
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公开(公告)号：CN104762248B
公开(公告)日：2018-02-23
申请号：CN201510134393.X
申请日：2015-03-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产异淀粉酶的基因工程菌及其发酵工艺，属于基因工程和发酵工程技术领域。本发明以E.coli MDS42为宿主，构建了高产异淀粉酶的基因工程菌E.coli MDS42(Tfu_1891/pSX2)。该菌株产酶水平高，生产成本较低。以该菌株为生产菌株在发酵罐进行发酵产酶，酶活力可达16434U/mL，蛋白表达量可达13.4g/L。本发明降低了异淀粉酶生产成本，可实现异淀粉酶的工业化生产。
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公开(公告)号：CN102533701B
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201210035298.0
申请日：2012-02-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过促进活性蛋白聚集体解聚提高淀粉脱支酶产量的方法，属于发酵工程技术领域。本发明以重组大肠杆菌pulB/pET20b(+)/BL21(DE3)为生产菌株，在工业级发酵培养基中连续流加甘油进行分批补料发酵，发酵后期通过添加Tween 80来促进活性蛋白聚集体解聚提高酶的分泌，发酵35小时，胞外酶活可达386U/mL。采取本策略进行发酵实现了酶的高效胞外表达，大幅提高了生产强度。由于酶分泌到培养基中，菌体经过简单的过滤就可得到酶液，工艺简单易行，减少了后续提取成本，适合工业化生产。
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公开(公告)号：CN104059901A
公开(公告)日：2014-09-24
申请号：CN201410201468.7
申请日：2014-05-06
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/90
CPC classification number: C12N9/90 , C12N15/1031 , C12Y504/99011
Abstract: 本发明公开了两种普城沙雷氏杆菌(Serratia plymuthica)蔗糖异构酶突变体及其制备方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明提供了一种能使蔗糖异构酶热稳定性及分泌效率均得到提高的突变方案。通过对蔗糖异构酶晶体结构中B因子最高的氨基酸进行定点突变，即将蔗糖异构酶576位置处的K突变成P或D来提高蔗糖异构酶的热稳定性和分泌效率。本发明得到的两种突变体，至少以下性质之一发生改变：1)在pH6.0，40℃和45℃条件下的热稳定性提高；2)所需诱导剂IPTG的浓度大大降低，同时重组菌发酵后的胞外分泌效率显著提高。K576P和K576D两种突变体比天然蔗糖异构酶更适用于工业生产制备及应用。
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公开(公告)号：CN102978191A
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201210519218.9
申请日：2012-11-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种淀粉脱支酶的发酵生产工艺，属于发酵工程技术领域。本发明采用重组大肠杆菌E.coLi BL21(DE3)为生产菌株，在工业级发酵培养基中连续流加甘油进行分批补料发酵，在发酵过程中添加甜菜碱，对数生长中期流加乳糖进行诱导，发酵后期添加Tween80促进酶的分泌，淀粉脱支酶酶活达到1400U/mL。采取本策略进行发酵实现了淀粉脱支酶的高效可溶性表达，大幅提高了脱支酶的生产强度。本工艺采用工业上常用的甘油、蛋白胨、酵母粉等原料进行生产，简单易行，适于大规模生产。
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