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公开(公告)号：CN108060170A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201711468398.1
申请日：2017-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明为一种新型金属离子耐受性角蛋白酶及其应用，提供了一种基于宏基因组技术挖掘的角蛋白酶及其应用方法，属于工业生物技术领域。该角蛋白酶基因全长1,149bp，编码382个氨基酸；以枯草芽孢杆菌B.subtilis WB600为例，成功实现了该角蛋白酶基因的异源表达。该角蛋白酶基因的获取方法方便可行，将该基因进行重组表达，构建的重组菌株可以实现重组角蛋白酶的分泌表达，重组角蛋白酶对金属离子和表面活性剂表现出较好的耐受性，酶稳定性较好。重组菌发酵周期短，适合于工业化大规模的生产。另外，该酶具有良好的还原能力，能应用于生物法制备纳米银粒子的研究中，制备得到的纳米银粒子具有良好的形态，并且具有较好的抑菌活性。
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公开(公告)号：CN111763677A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010700360.8
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN111763675B
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202010699002.X
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50 , C12R1/125 , C12R1/085 , C12R1/10 , C12R1/11 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一种提升角蛋白酶异源表达的启动子，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN108949729B
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN201810933226.5
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/50 , C12N15/57 , C12N15/70 , C12N15/74 , C12N15/81 , C12N15/80 , C12N1/21 , C12N1/15 , C12N1/19 , C12P21/06
Abstract: 本发明公开了一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体，属于工业生物技术领域。本发明基于角蛋白酶三维结构模型，针对角蛋白酶的酶蛋白Loop区域上的8个关键氨基酸残基位点，采用一步反向PCR构建热稳定性突变重组菌，热稳定性研究结果显示突变体N218S角蛋白酶在60℃的热稳定性提高了3倍以上。利用角蛋白酶进行降解羽毛研究。观察到角蛋白酶处理48h后的羽毛表面呈现开叉、毛糙状，羽毛降解率达到25％，羽毛降解液中氨基酸总含量增加了1.82mg/mL。该研究为降解羽毛制备高质量饲料以及降解硬质角蛋白废弃物奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111763677B
公开(公告)日：2022-10-04
申请号：CN202010700360.8
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108060170B
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN201711468398.1
申请日：2017-12-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明为一种新型金属离子耐受性角蛋白酶及其应用，提供了一种基于宏基因组技术挖掘的角蛋白酶及其应用方法，属于工业生物技术领域。该角蛋白酶基因全长1,149bp，编码382个氨基酸；以枯草芽孢杆菌B.subtilis WB600为例，成功实现了该角蛋白酶基因的异源表达。该角蛋白酶基因的获取方法方便可行，将该基因进行重组表达，构建的重组菌株可以实现重组角蛋白酶的分泌表达，重组角蛋白酶对金属离子和表面活性剂表现出较好的耐受性，酶稳定性较好。重组菌发酵周期短，适合于工业化大规模的生产。另外，该酶具有良好的还原能力，能应用于生物法制备纳米银粒子的研究中，制备得到的纳米银粒子具有良好的形态，并且具有较好的抑菌活性。
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公开(公告)号：CN109022438A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810933416.7
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子及其应用，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN111763675A
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN202010699002.X
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50 , C12R1/125 , C12R1/085 , C12R1/10 , C12R1/11 , C12R1/07
Abstract: 本发明公开了一种提升角蛋白酶异源表达的启动子，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN109022438B
公开(公告)日：2020-06-23
申请号：CN201810933416.7
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N9/50
Abstract: 本发明公开了一种角蛋白酶异源表达的启动子及其应用，属于工业生物技术领域。本发明成功构建了携带16种不同启动子序列的角蛋白酶重组菌，其中7种能够提高角蛋白酶表达量，PaprE启动子改造重组菌的酶活水平最高，达到2605U/mL，相比对照菌提高20倍。在5L发酵罐上发酵液中角蛋白酶活力高达7176U/mL，是目前文献报道重组角蛋白酶表达的最高水平，能更好地服务于实际应用。本发明为角蛋白酶的高效表达及产酶研究提供了一种有效策略。传统基因工程改造通常需构建高通量筛选方法，进行大量文库筛选，工作量大、周期长、成本高，该改造方法相比传统方法极大的减小了工作量，提高了高表达效率。
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公开(公告)号：CN108949729A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810933226.5
申请日：2018-08-16
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/50 , C12N15/57 , C12N15/70 , C12N15/74 , C12N15/81 , C12N15/80 , C12N1/21 , C12N1/15 , C12N1/19 , C12P21/06
Abstract: 本发明公开了一种经热稳定性改造的角蛋白酶突变体，属于工业生物技术领域。本发明基于角蛋白酶三维结构模型，针对角蛋白酶的酶蛋白Loop区域上的8个关键氨基酸残基位点，采用一步反向PCR构建热稳定性突变重组菌，热稳定性研究结果显示突变体N218S角蛋白酶在60℃的热稳定性提高了3倍以上。利用角蛋白酶进行降解羽毛研究。观察到角蛋白酶处理48h后的羽毛表面呈现开叉、毛糙状，羽毛降解率达到25％，羽毛降解液中氨基酸总含量增加了1.82mg/mL。该研究为降解羽毛制备高质量饲料以及降解硬质角蛋白废弃物奠定了基础。
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