公开(公告)号：CN117467632B

公开(公告)日：2024-09-24

申请号：CN202210889750.3

申请日：2022-07-27

Applicant: 江南大学 ,  南京汉欣医药科技有限公司

Inventor： 康振 ,  王阳 ,  陈松 ,  汤传根 ,  郗欣彤 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  孟俊东

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence:NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。

公开(公告)号：CN117467632A

公开(公告)日：2024-01-30

申请号：CN202210889750.3

申请日：2022-07-27

Applicant: 江南大学 ,  南京汉欣医药科技有限公司

Inventor： 康振 ,  王阳 ,  陈松 ,  汤传根 ,  郗欣彤 ,  陈坚 ,  堵国成 ,  孟俊东

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/18 ,  C12P19/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence:NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。

公开(公告)号：CN116676357A

公开(公告)日：2023-09-01

申请号：CN202310567625.5

申请日：2023-05-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 康振 ,  陈坚 ,  郗欣彤 ,  堵国成 ,  王阳

IPC: C12P19/26 ,  C12N9/10

Abstract: 本发明公开了一种N‑磺酸化肝素前体寡糖的制备方法，属于生物工程技术领域。本发明利用肝素裂解酶III和不饱和葡萄糖醛酸酶对高分子量肝素前体的依次降解，成功制备获得不同聚合度的不饱和偶数寡糖和饱和奇数寡糖，并利用人源硫酸乙酰肝素双功能N‑脱乙酰/N‑磺基转移酶对特定聚合度的肝素前体寡糖进行了催化，获得了具有特定聚合度的N‑磺酸化肝素前体寡糖，为后续酶法催化获得肝素寡糖提供了底物来源。