公开(公告)号：CN104059863A

公开(公告)日：2014-09-24

申请号：CN201410186926.4

申请日：2014-05-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  赵芹芹 ,  罗玉常 ,  窦文芳 ,  张晓梅 ,  耿燕 ,  史劲松 ,  饶志明

IPC: C12N1/20 ,  C12N15/01 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明提供一种高效提高钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)SYPA5-5L-精氨酸生产能力的代谢改造策略，属于生物技术领域。将SYPA5-5的N-乙酰谷氨酸激酶(N-acetylglutamatekinase,NAGK,argB)中268位的组氨酸突变为天冬酰胺，可有效解除L-精氨酸对NAGK的反馈抑制作用；将突变位点精确引入SYPA5-5基因组的相应位置，获得的抗反馈抑制菌株(H-7)L-精氨酸产量降低，中间代谢产物(L-鸟氨酸及L-瓜氨酸)大量积累。对H-7的arg基因簇进行转录分析，发现argGH转录水平降低。在H-7中对argGH加强表达，获得的重组菌株H-7-GH，L-精氨酸生产能力较SYPA5-5提高99.0%。对H-7-GH的发酵培养基进行初步优化，L-精氨酸产量达45.1g/L，较优化前提高了49.8%，较SYPA5-5提高了1.13倍。解除L-精氨酸对NAGK的反馈抑制，同时加强表达argGH基因的代谢改造策略，有效提高SYPA5-5的L-精氨酸生产能力。

公开(公告)号：CN103436504A

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201310389798.9

申请日：2013-09-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  史劲松 ,  罗玉常 ,  窦文芳 ,  张晓梅 ,  陆震鸣 ,  许鸿瑜 ,  李会 ,  李恒 ,  耿燕 ,  张旦旦 ,  蒋敏 ,  赵芹芹 ,  钱建瑛

IPC: C12N9/04 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P13/06 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明利用分子生物学技术，通过基因组工程的方法对谷氨酸棒杆菌SYPS-062L-丝氨酸生物合成途径关键酶3-磷酸甘油酸脱氢酶编码基因在基因组水平进行进化，使得重组菌株组成稳定表达抗L-丝氨酸反馈抑制的3-磷酸甘油酸脱氢酶突变体。本发明的重组谷氨酸棒杆菌SYPS-062△S能够抗L-丝氨酸的反馈抑制，实现发酵过程中高效积累L-丝氨酸。

公开(公告)号：CN104195162A

公开(公告)日：2014-12-10

申请号：CN201410191483.8

申请日：2014-05-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  窦文芳 ,  史劲松 ,  赵芹芹 ,  罗玉常 ,  张晓梅 ,  耿燕 ,  吴珊珊

IPC: C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明敲除钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5中编码精胺琥珀酸合成酶(Argininosuccinate synthase，ASS)的argG基因，对获得的重组菌株进行发酵产L-瓜氨酸的研究，属于生物技术领域。首先，构建argG基因内缺失片段(△argG)，连接至pK18mobsacB中获得重组质粒pK18mobsacB△argG，将其电转入SYPA5-5中，经两次同源重组，筛选获得重组菌株SYPA5-5△argG。其次，考察不同浓度L-精氨酸对重组菌株生长及发酵产L-瓜氨酸的影响，发现添加L-精氨酸有利于菌体生长但不利于L-瓜氨酸积累。在不添加L-精氨酸条件下，重组菌株利用糖质原料，发酵96h，可积累15.2g/LL-瓜氨酸，糖酸转化效率为0.15g(L-citrulline)/g(glucose)。

公开(公告)号：CN104031933A

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201410191782.1

申请日：2014-05-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  窦文芳 ,  史劲松 ,  赵芹芹 ,  罗玉常 ,  张晓梅 ,  耿燕 ,  刘雪

IPC: C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明敲除钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)SYPA5-5中编码鸟氨酸乙酰转移酶(Ornithinecarbamoyltransferase，OTC)的argF基因，对获得的重组菌株进行发酵产L-鸟氨酸的研究，属于生物技术领域。首先，构建argF基因内缺失片段(△argF)，连接至pK18mobsacB中获得重组质粒pK18mobsacB△argF，将其电转入SYPA5-5中，经两次同源重组，筛选获得重组菌株SYPA5-5△argF。其次，考察不同营养条件对重组菌株生长及L-鸟氨酸积累的影响，发现添加0.3g/LL-精氨酸可满足SYPA5-5△argF的生长及L-鸟氨酸积累所需，利用糖质原料，发酵96h，L-鸟氨酸产量可达21.5g/L，糖酸转化效率为0.17g(L-ornithine)/g(glucose)。

公开(公告)号：CN104450816A

公开(公告)日：2015-03-25

申请号：CN201410190809.5

申请日：2014-05-08

Applicant: 江南大学

Inventor： 许正宏 ,  赵芹芹 ,  窦文芳 ,  罗玉常 ,  张晓梅 ,  耿燕 ,  史劲松

IPC: C12P13/10 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明提供一种以酵母粉代替钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)发酵培养基中玉米浆组分进行发酵提高L-精氨酸产量的方法，属于生物技术领域。分别考察不同浓度酵母粉及玉米浆对钝齿棒杆菌生长及积累L-精氨酸的影响，玉米浆的最适添加浓度为25 g/L，酵母粉的最适添加浓度为10 g/L，发酵96 h后，酵母粉较玉米浆的添加发酵，L-精氨酸产量提高29.5%，生物量降低8.5%，单位菌体L-精氨酸产量提高40.8%，用酵母粉代替玉米浆有利于L-精氨酸的积累。同时，由于酵母粉成分相对稳定，不同批次发酵，L-精氨酸产量差异小。所以，用酵母粉代替玉米浆进行发酵，对于L-精氨酸生产菌株的发酵特性研究及L-精氨酸工业化生产具有重要意义。

公开(公告)号：CN103820485A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201310391569.0

申请日：2013-09-02

Applicant: 江南大学 ,  广东环西生物科技股份有限公司

Inventor： 许正宏 ,  史劲松 ,  罗玉常 ,  窦文芳 ,  张晓梅 ,  张旦旦 ,  陆震鸣 ,  许鸿瑜 ,  李恒 ,  李会 ,  耿燕 ,  赵芹芹 ,  方佳茂 ,  陈伟滨

IPC: C12N15/77 ,  C12N1/21 ,  C12R1/15

Abstract: 本发明公开了一种减少L-丝氨酸生产菌株谷氨酸棒杆菌SYPS-062代谢副产物的方法。本发明利用分子生物学技术顺次将L-丝氨酸脱氨酶（L-serinedeaminase）的编码基因sdaA，及L-丙氨酸和L-缬氨酸生物合成途径中的转氨酶编码基因alaT和ilvE在谷氨酸棒杆菌SYPS-062△S基因组顺序敲除，最终构建一株sdaA,alaT和ilvE组合敲除的重组菌株谷氨酸棒杆菌SYPS-062△S-Ⅲ。