公开(公告)号：CN120025957A

公开(公告)日：2025-05-23

申请号：CN202510180128.9

申请日：2025-02-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  朱莺莺 ,  盛冕 ,  刘苑琳 ,  张文立

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/54 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12P19/26 ,  C12P19/24 ,  C12P19/18 ,  C12P19/14 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了合成唾液酸乳酰‑N‑四糖a的工程大肠杆菌及其构建方法、应用，属于微生物代谢工程技术领域。本发明以重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)ΔlacZΔwecBΔnagBΔugD，ΔrecA：：Ptac‑galEΔISl86‑1：：Ptac‑lgtA，ΔIS186‑2：：Ptac‑lgtA，ΔIS186‑4：：Ptac‑lgtA，ΔIS186‑5：：Ptac‑lgtA为起始菌株，通过敲除5′‑胞苷酸‑N‑乙酰神经氨基酸竞争途径基因nanA、nanT、nanK和nanE，过表达5′‑胞苷酸‑N‑乙酰神经氨基酸通路基因nenC、nenB、nenA和β‑1，3‑半乳糖基转移酶基因wbgO以及α2,3‑唾液转移酶特异性基因Pm0188，获得一种稳定合成唾液酸乳酰‑N‑四糖a的重组大肠杆菌。通过筛选更高效的α2,3‑唾液基转移酶并优化途径基因表达组合，提高了唾液酸乳酰‑N‑四糖a产量，在摇瓶培养和补料分批培养下，最终获得产量分别为1.235和4.85g/L的唾液酸乳酰‑N‑四糖a。