公开(公告)号：CN108795889B

公开(公告)日：2021-04-20

申请号：CN201810663221.5

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶的突变体和突变株，所述反式茴香脑加氧酶的突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，其185位氨基酸Glu变为Asp，所述反式茴香脑加氧酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。合成对茴香醛、藜芦醛、洋茉莉醛、香兰素的转化速率分别为原始菌株的1.91、2.08、1.33、1.92倍，5F4在生物法合成芳香醛香料中，展现了良好的应用潜力，同时5F4的催化时pH的适应性更广泛，更适合用工业生产应用，能够降低成本，提高生产效率。

公开(公告)号：CN108753912B

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN201810663244.6

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 郑璞 ,  刘思琴 ,  王玉琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12Q1/26 ,  C40B50/06 ,  C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体的高通量筛选方法及突变菌株和突变体，包括以反式茴香脑加氧酶基因为模板，进行易错PCR，获得反式茴香脑加氧酶突变体文库；将所述反式茴香脑加氧酶反应底物添加入含有反式茴香脑加氧酶突变体的溶液中进行催化反应，将反应液与2,4‑二硝基苯肼进行显色反应，并加入碱溶液及有机溶剂反应，测定吸光度。本发明通过易错PCR构建突变库，并建立以2,4‑二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势，突变株LSQ‑3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均显著提高，具有良好的应用价值。

公开(公告)号：CN108753742B

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN201810662130.X

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体及其突变株，其中，所述反式茴香脑加氧酶突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，319位氨基酸脯氨酸变为丝氨酸，所述反式茴香脑加氧酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。本发明通过易错PCR的方式，随机突变了反式茴香脑加氧酶，并导入到E.Coli BL21(DE3)中，经过筛选后获得突变重组菌4C7，其合成对茴香醛、藜芦醛的转化速率分别为原始野生型菌株的2.05、2.38倍，更适合用工业生产应用，能够降低成本，显著提高生产效率。

公开(公告)号：CN108753743A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810663210.7

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了反式茴香脑加氧酶突变体和突变株。所述反式茴香脑加氧酶突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，其75位氨基酸Thr变为Met，331位氨基酸Phe变为Leu，所述反式茴香脑加氧酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。其合成对茴香醛、藜芦醛、洋茉莉醛、香兰素的转化速率分别为原始菌株的1.17、1.39、1.34、1.51倍，在生物法合成芳香醛香料中，展现了良好的应用潜力。

公开(公告)号：CN108753743B

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN201810663210.7

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了反式茴香脑加氧酶突变体和突变株。所述反式茴香脑加氧酶突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，其75位氨基酸Thr变为Met，331位氨基酸Phe变为Leu，所述反式茴香脑加氧酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。其合成对茴香醛、藜芦醛、洋茉莉醛、香兰素的转化速率分别为原始菌株的1.17、1.39、1.34、1.51倍，在生物法合成芳香醛香料中，展现了良好的应用潜力。

公开(公告)号：CN108753912A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810663244.6

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 郑璞 ,  刘思琴 ,  王玉琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12Q1/26 ,  C40B50/06 ,  C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

CPC classification number: C12Q1/26 ,  C12N9/0069 ,  C12N15/70 ,  C40B50/06 ,  G01N2333/90241

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体的高通量筛选方法及突变菌株和突变体，包括以反式茴香脑加氧酶基因为模板，进行易错PCR，获得反式茴香脑加氧酶突变体文库；将所述反式茴香脑加氧酶反应底物添加入含有反式茴香脑加氧酶突变体的溶液中进行催化反应，将反应液与2,4‑二硝基苯肼进行显色反应，并加入碱溶液及有机溶剂反应，测定吸光度。本发明通过易错PCR构建突变库，并建立以2,4‑二硝基苯肼为显色剂，酶标仪测定OD470为基础的高通量筛选方式，筛选合成洋茉莉醛重组菌株的突变菌株，该方式具有高效、精准、快速的优势，突变株LSQ‑3对于合成洋茉莉醛、对茴香醛以及香兰素的催化效率均显著提高，具有良好的应用价值。

公开(公告)号：CN108795889A

公开(公告)日：2018-11-13

申请号：CN201810663221.5

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21

CPC classification number: C12N9/0083 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶的突变体和突变株，所述反式茴香脑加氧酶的突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，其185位氨基酸Glu变为Asp，所述反式茴香脑加氧酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。合成对茴香醛、藜芦醛、洋茉莉醛、香兰素的转化速率分别为原始菌株的1.91、2.08、1.33、1.92倍，5F4在生物法合成芳香醛香料中，展现了良好的应用潜力，同时5F4的催化时pH的适应性更广泛，更适合用工业生产应用，能够降低成本，提高生产效率。

公开(公告)号：CN108753742A

公开(公告)日：2018-11-06

申请号：CN201810662130.X

申请日：2018-06-25

Applicant: 江南大学

Inventor： 王玉琴 ,  郑璞 ,  刘思琴 ,  陈鹏程 ,  闻鹏

IPC: C12N9/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种反式茴香脑加氧酶突变体及其突变株，其中，所述反式茴香脑加氧酶突变体与野生型反式茴香脑加氧酶氨基酸序列相比，319位氨基酸脯氨酸变为丝氨酸，所述反式茴香脑加氧酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示。本发明通过易错PCR的方式，随机突变了反式茴香脑加氧酶，并导入到E.Coli BL21(DE3)中，经过筛选后获得突变重组菌4C7，其合成对茴香醛、藜芦醛的转化速率分别为原始野生型菌株的2.05、2.38倍，更适合用工业生产应用，能够降低成本，显著提高生产效率。