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公开(公告)号：CN103409385A
公开(公告)日：2013-11-27
申请号：CN201310340689.8
申请日：2013-08-07
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种发酵生产谷氨酰胺转胺酶酶原的方法，以谷氨酰胺转胺酶酶原突变体E62D-tag1为出发菌株，用氨水控制pH不小于7，当溶氧反弹时开始指数流加方式补料；至诱导浓度时，添加甘氨酸和CaCl2，并开始恒速流加补料液。采用本发明的方法可以大大提高谷氨酰胺转胺酶酶原的产量。
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公开(公告)号：CN103421753B
公开(公告)日：2015-02-11
申请号：CN201310315275.X
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。本发明还公开了上述突变体的构建方法，1）通过PCR或化学全合成的方法获得Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062，得到谷氨酰胺转胺酶基因序列及其上下游序列，序列如Genbank：EU477523所示，克隆到表达载体；2）通过缺失突变获得Del1-4谷氨酰胺转胺酶突变体；3）以在步骤2）获得的突变体基础上，通过定点突变对E62进行突变，获得突变体Del1-4/E62D谷氨酰胺转胺酶突变体；4）在步骤3）获得的突变体基础上，融合tag1获得如SEQ ID NO.1所示的谷氨酰胺转胺酶突变体。本发明提供的突变体在48h胞外积累量最高，酶活可达14.8U/mL，与野生酶相比提高49%，生产强度也由0.21U/ml/h增加到0.31U/ml/h。
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公开(公告)号：CN103421755B
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201310315565.4
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酰胺转胺酶比酶活的方法，属于酶工程领域。利用定点突变技术在吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶前导肽与成熟酶之间插入来自谷氨酰胺转胺酶成熟酶内部对TGase催化活性具有重要作用的loop或催化活性中心附近的氨基酸序列，获得了比酶活提高40%的突变酶，更适用于工业生产应用。
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公开(公告)号：CN103710322A
公开(公告)日：2014-04-09
申请号：CN201410008840.2
申请日：2014-01-08
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/1044 , C12Y203/02013
Abstract: 本发明公开了一种基于前导肽置换突变的高比酶活谷氨酰胺转胺酶突变体，属于酶工程领域。本发明利用定点突变技术将Streptomyces hygroscopicus的pro-TGase前导肽C端α-螺旋37-42(QPGNSL)分别置换成3个丙氨酸或3个甘氨酸，与S.hygroscopicus野生酶相比，本发明所提供的S.hygroscopicus TGase突变体pro-37-42AAA和pro-37-42GGG的比酶活分别提高了22.2%和24.8%，Km值降低，更利于底物与催化活性中心的结合，适用于工业应用，还为同类蛋白分子改造提供新的思路。
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公开(公告)号：CN103421754A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310315293.8
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种前导肽C端α-螺旋37-42缺失的谷氨酰胺转胺酶突变体，属于酶工程领域。本发明利用定点突变技术对Streptomyces hygroscopicus的pro-TGase前导肽C端α-螺旋37-42进行缺失突变，与野生酶相比，突变酶比酶活提高13.7%，TGase催化活性得到显著提高，适用于工业应用，还为同类蛋白分子改造提供新的思路。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103387964A
公开(公告)日：2013-11-13
申请号：CN201310287699.X
申请日：2013-07-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定脂肪氧合酶突变体及其构建方法，属于酶工程技术领域。通过PCR法分别对脂肪氧合酶的盖子结构201-TQRGQG-206进行G204P、G206P、G204P/G206P及L6loop→PT linker突变，并得到具有热稳定性的脂肪氧合酶。与野生酶相比，脂肪氧合酶突变体在50℃下的半衰期及最适反应温度均有显著提高，改造后的酶更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。
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公开(公告)号：CN103554223B
公开(公告)日：2015-05-13
申请号：CN201310316129.9
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酰胺转氨酶热稳定性的短肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；本发明还公开了一种热稳定性提高的谷氨酰胺转氨酶，其特征在于C端含有上述短肽，氨基酸如SEQ ID NO.2所示。应用上述短肽能显著提高谷氨酰胺转氨酶的热稳定性，其50℃的半衰期由3.7min延长至9.1min，提高1.5倍；TG-tag1熔解温度为76.4oC，与野生酶相比提高7.5℃。
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公开(公告)号：CN103540574A
公开(公告)日：2014-01-29
申请号：CN201310428806.6
申请日：2013-09-18
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/10
CPC classification number: C12N9/1044 , C12Y203/02013
Abstract: 本发明公开了一种提高谷氨酰胺转氨酶的比酶活及活化效率的方法，在谷氨酰胺转胺酶C端插入融合蛋白中常用的连接肽，上述连接肽的基因序列设计在引物上，利用定点突变技术插入到前导肽C端，其优选GS或PT。采用本发明提供的方法在不改变谷氨酰胺转氨酶分泌效率的前提下，显著提高谷氨酰胺转氨酶的比酶活，具有重要的意义。此外，本发明还发现使用本发明提供的短肽能显著提高TGase前导肽切割效率，缩短反应时间2/3。
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公开(公告)号：CN103421753A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310315275.X
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶活和热稳定性提高的谷氨酰胺转胺酶突变体，其氨基酸序列如SEQID NO.1所示。本发明还公开了上述突变体的构建方法，1）通过PCR或化学全合成的方法获得Streptomyces hygroscopicus CCTCC M203062，得到谷氨酰胺转胺酶基因序列及其上下游序列，序列如Genbank：EU477523所示，克隆到表达载体；2）通过缺失突变获得Del1-4谷氨酰胺转胺酶突变体；3）以在步骤2）获得的突变体基础上，通过定点突变对E62进行突变，获得突变体Del1-4/E62D谷氨酰胺转胺酶突变体；4）在步骤3）获得的突变体基础上，融合tag1获得如SEQ ID NO.1所示的谷氨酰胺转胺酶突变体。本发明提供的突变体在48h胞外积累量最高，酶活可达14.8U/mL，与野生酶相比提高49%，生产强度也由0.21U/ml/h增加到0.31U/ml/h。
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公开(公告)号：CN103421752A
公开(公告)日：2013-12-04
申请号：CN201310315261.8
申请日：2013-07-25
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种前导肽C端loop43-52缺失的谷氨酰胺转胺酶突变体，属于酶工程领域。本发明利用定点突变技术对Streptomyces hygroscopicus的pro-TGase前导肽C端loop43-52进行缺失突变，所得突变酶表现出较高的胞外蛋白含量和TGase酶活，最高酶活为4.6U/mL，与野生酶相比提高70%，胞外分泌积累得到极大的提升，适用于工业应用，还为同类蛋白分子改造提供新的思路。
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