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公开(公告)号：CN113061608A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110308846.1
申请日：2021-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导型启动子的进化方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过易错PCR对麦芽糖诱导型启动子进行突变获得启动子突变体库，再通过偶联细胞生长的方式高通量筛选突变体，获得不同响应灵敏度和强度的启动子突变体；所述麦芽糖诱导型启动子后连有编码融合蛋白的基因，所述融合蛋白能够同时发挥双重筛选标记和定量报告基因表达量的作用。本发明进化得到的诱导型启动子对诱导剂麦芽糖的响应阈值范围从0‑3g/L扩展至0‑25g/L，最高诱导表达强度较原始启动子提高约3.5倍。
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公开(公告)号：CN113061608B
公开(公告)日：2022-12-13
申请号：CN202110308846.1
申请日：2021-03-23
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导型启动子的进化方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过易错PCR对麦芽糖诱导型启动子进行突变获得启动子突变体库，再通过偶联细胞生长的方式高通量筛选突变体，获得不同响应灵敏度和强度的启动子突变体；所述麦芽糖诱导型启动子后连有编码融合蛋白的基因，所述融合蛋白能够同时发挥双重筛选标记和定量报告基因表达量的作用。本发明进化得到的诱导型启动子对诱导剂麦芽糖的响应阈值范围从0‑3g/L扩展至0‑25g/L，最高诱导表达强度较原始启动子提高约3.5倍。
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公开(公告)号：CN116200323B
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202310252149.8
申请日：2023-03-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产蛋白质谷氨酰胺酶的菌株及其应用，属于基因工程与发酵工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌168为初始菌株，构建了含有转录调控因子comk片段与Vpr蛋白酶启动子替换片段的重组菌株，并转化蛋白质谷氨酰胺酶表达质粒，获得了产活性蛋白质谷氨酰胺酶的枯草芽孢杆菌重组菌株BSK2‑PG。通过木糖诱导发酵及酶活检测，发现该重组菌株能获得活性蛋白质谷氨酰胺酶的表达与累积。且通过优化木糖添加时间与添加浓度，发酵59‑72h后，摇瓶发酵酶活为7.2U/mL，发酵罐发酵酶活为25U/mL。所述重组菌株可以广泛应用于蛋白质谷氨酰胺酶的生产，有利于降低该酶的生产成本。
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公开(公告)号：CN116200323A
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202310252149.8
申请日：2023-03-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一株产蛋白质谷氨酰胺酶的菌株及其应用，属于基因工程与发酵工程领域。本发明以枯草芽孢杆菌168为初始菌株，构建了含有转录调控因子comk片段与Vpr蛋白酶启动子替换片段的重组菌株，并转化蛋白质谷氨酰胺酶表达质粒，获得了产活性蛋白质谷氨酰胺酶的枯草芽孢杆菌重组菌株BSK2‑PG。通过木糖诱导发酵及酶活检测，发现该重组菌株能获得活性蛋白质谷氨酰胺酶的表达与累积。且通过优化木糖添加时间与添加浓度，发酵59‑72h后，摇瓶发酵酶活为7.2U/mL，发酵罐发酵酶活为25U/mL。所述重组菌株可以广泛应用于蛋白质谷氨酰胺酶的生产，有利于降低该酶的生产成本。
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