公开(公告)号：CN114686505A

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN202011634908.X

申请日：2020-12-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 余世琴 ,  周景文 ,  杨文涵 ,  陈坚 ,  堵国成

IPC: C12N15/70 ,  C12N9/10 ,  C12Q1/48 ,  C12Q1/28 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于微流控芯片高通量筛选氟化酶突变体的方法，包括如下步骤：(1)氟化酶的表面展示以及突变文库的建立；(2)基于微流控芯片建立的酶偶联荧光反应；(3)芯片设计和测试液滴孵育池的选择以及空液滴的弃置(4)筛选流程(5)突变体的复筛和活性验证以及测序验证筛选。本发明本发明提供的方法基于微流控芯片首次实现真正的(超)高通量筛选，从而大大提高了获取理想突变酶的几率。本发明设计的酶偶联方法和在芯片应用对背景信号、荧光淬灭和荧光染料扩散进行了提供了全新的可行的解决方案。

公开(公告)号：CN115927138A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202210950271.8

申请日：2022-08-09

Applicant: 江南大学

Inventor： 余世琴 ,  周景文 ,  杨文涵 ,  吴美琪 ,  陈坚 ,  堵国成

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12P7/26 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于表面展示羰基还原酶的全细胞催化合成2‑甲基苯甲酮的方法，属于基因和生物工程领域。本发明通过锚定蛋白将羰基还原酶展示在大肠杆菌表面，固定化的羰基还原酶能够通过简单的离心收集进行重复催化，同时规避了胞内复杂的其他酶催化反应，避免了复杂的纯化步骤，可以提高下游分离纯化的效率并节省成本。有利于工业化生产2‑甲级苯甲酮。

公开(公告)号：CN113355343A

公开(公告)日：2021-09-07

申请号：CN202110789583.0

申请日：2021-07-13

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  杨文涵 ,  余世琴 ,  堵国成 ,  陈坚

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于自组装的表面展示氟化酶的方法，属于基因和生物工程领域。本发明通过模块化的方法，将靶蛋白与载体蛋白独立表达，通过翻译后原位组装即可实现复杂蛋白的表面展示。本发明所使用的SC‑ST系统，实现了六亚基结构氟化酶在大肠杆菌表面的展示，避免了复杂的纯化步骤，可以提高下游分离纯化的效率并节省成本。有利于实现氟化酶在工业化生产中的应用。

公开(公告)号：CN112575019A

公开(公告)日：2021-03-30

申请号：CN202011630839.5

申请日：2020-12-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 周景文 ,  杨文涵 ,  余世琴 ,  堵国成 ,  陈坚

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种基于自组装的表面展示氟化酶的方法，属于基因和生物工程领域。本发明通过模块化的方法，将靶蛋白与载体蛋白独立表达，通过翻译后原位组装即可实现复杂蛋白的表面展示。本发明所使用的SC‑ST系统，实现了六亚基结构氟化酶在大肠杆菌表面的展示，避免了复杂的纯化步骤，可以提高下游分离纯化的效率并节省成本。有利于实现氟化酶在工业化生产中的应用。