公开(公告)号：CN111269907B

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202010260033.5

申请日：2020-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 李恒 ,  史劲松 ,  李星霖 ,  吴雯 ,  龚劲松 ,  许正宏

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P19/00

Abstract: 本发明公开了一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明基于褐藻胶裂解酶的结构推测，采用结构序列分析方法，确定对催化域附近的loop区域进行改造，并通过定点突变和组合突变进行改造，得到对PolyG片段具有较高的降解能力的突变体；将亲本褐藻胶裂解酶氨基酸序列中位于催化域附近的loop区205位、210位突变为酪氨酸，将褐藻胶裂解酶对底物的偏好性由M转变为G，酶活6100U/mL，稳定性得以提高。

公开(公告)号：CN109852601A

公开(公告)日：2019-06-07

申请号：CN201910159781.1

申请日：2019-03-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 李恒 ,  史劲松 ,  许正宏 ,  龚劲松 ,  郝瑶 ,  李星霖

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12P19/04 ,  C12P19/00

Abstract: 本发明公开了一种可高效应用的N-糖基化褐藻胶裂解酶突变体及基因工程菌构建方法，属于生物技术领域。本发明是在褐藻胶裂解酶Aly-Cob的基础上，在其N端引入DQNAT重复序列片段作为N-糖基化位点，同时融合表达载体蛋白YebF进行胞外分泌，进而由空肠弯曲杆菌来源的糖基化体系pgl以糖链GalNAc2(Glc)GalNAc3Bac进行糖基化修饰。所得突变体酶NACob在酶活及稳定性上均较糖基化前得以提高。本发明提供的N-糖基化修饰褐藻胶裂解酶突变体可广泛应用于海藻加工利用相关的食品、医药、农业等领域。

公开(公告)号：CN111269907A

公开(公告)日：2020-06-12

申请号：CN202010260033.5

申请日：2020-04-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 李恒 ,  史劲松 ,  李星霖 ,  吴雯 ,  龚劲松 ,  许正宏

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12P19/00

Abstract: 本发明公开了一种基于loop区域改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。本发明基于褐藻胶裂解酶的结构推测，采用结构序列分析方法，确定对催化域附近的loop区域进行改造，并通过定点突变和组合突变进行改造，得到对PolyG片段具有较高的降解能力的突变体；将亲本褐藻胶裂解酶氨基酸序列中位于催化域附近的loop区205位、210位突变为酪氨酸，将褐藻胶裂解酶对底物的偏好性由M转变为G，酶活6100U/mL，稳定性得以提高。

公开(公告)号：CN111424027B

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202010245176.9

申请日：2020-03-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 史劲松 ,  李恒 ,  李星霖 ,  吴雯 ,  龚劲松

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的褐藻胶裂解酶的第212位谷氨酸替换为组氨酸和/或第222位精氨酸替换为赖氨酸。本发明通过分子对接模拟确定褐藻胶裂解酶活性中心氨基酸并进行定点饱和突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高褐藻胶裂解酶催化效率，进一步提高褐藻胶裂解酶产量。本发明构建的褐藻胶裂解酶分泌能力增强的重组大肠杆菌可将褐藻胶裂解酶酶活较出发菌株提高2.83倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产褐藻胶裂解酶酶活达到15000U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。

公开(公告)号：CN109852601B

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN201910159781.1

申请日：2019-03-04

Applicant: 江南大学

Inventor： 李恒 ,  史劲松 ,  许正宏 ,  龚劲松 ,  郝瑶 ,  李星霖

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/70 ,  C12P19/04 ,  C12P19/00

Abstract: 本发明公开了一种可高效应用的N‑糖基化褐藻胶裂解酶突变体及基因工程菌构建方法，属于生物技术领域。本发明是在褐藻胶裂解酶Aly‑Cob的基础上，在其N端引入DQNAT重复序列片段作为N‑糖基化位点，同时融合表达载体蛋白YebF进行胞外分泌，进而由空肠弯曲杆菌来源的糖基化体系pgl以糖链GalNAc2(Glc)GalNAc3Bac进行糖基化修饰。所得突变体酶NACob在酶活及稳定性上均较糖基化前得以提高。本发明提供的N‑糖基化修饰褐藻胶裂解酶突变体可广泛应用于海藻加工利用相关的食品、医药、农业等领域。

公开(公告)号：CN111424027A

公开(公告)日：2020-07-17

申请号：CN202010245176.9

申请日：2020-03-31

Applicant: 江南大学

Inventor： 史劲松 ,  李恒 ,  李星霖 ,  吴雯 ,  龚劲松

IPC: C12N9/88 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种定点突变改造的褐藻胶裂解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明的褐藻胶裂解酶突变体是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的褐藻胶裂解酶的第212位谷氨酸替换为组氨酸和/或第222位精氨酸替换为赖氨酸。本发明通过分子对接模拟确定褐藻胶裂解酶活性中心氨基酸并进行定点饱和突变改变蛋白质分子活性位点附近氨基酸残基，提高褐藻胶裂解酶催化效率，进一步提高褐藻胶裂解酶产量。本发明构建的褐藻胶裂解酶分泌能力增强的重组大肠杆菌可将褐藻胶裂解酶酶活较出发菌株提高2.83倍。改造后的基因工程菌产酶能力显著提高，摇瓶发酵生产褐藻胶裂解酶酶活达到15000U/mL，更适合工业应用，可降低生产成本，提高生产效率。